睾丸相关高度保守的致癌长链非编码RNA抑制miR-383-5p促进前列腺癌细胞增殖能力的机制研究

摘要

目的 探讨睾丸相关高度保守的致癌长链非编码RNA(THOR)促进前列腺癌(Pca)细胞增殖的机制。方法 采用qRT-PCR检测THOR在Pca组织样本及前列腺癌细胞系中的表达情况。采用siRNA干扰PC3和LNCaP细胞中THOR表达，采用CCK-8、细胞克隆法检测细胞增殖能力。采用qRT-PCR检测miR-383-5p在Pca组织样本及Pca细胞系中的表达情况。应用基因芯片和生物信息学分析探讨THOR与miR-383-5p的靶向关系，并利用双荧光素报告基因验证。应用miR-383-5p模拟物及抑制剂分别作用于PC3和LNCaP细胞后，采用Western blot检测miR-383-5p对胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白1(IGF2BP1)的靶向作用。THOR敲低及miR-383-5p抑制剂共同作用于Pca细胞，采用Western blot法分析IGF2BP1的表达。结果 THOR在Pca组织中的表达量相较于癌旁正常组织中显著上调(P<0.01), miR-383-5p的表达则显著下调(P<0.01)。下调THOR表达可以显著抑制Pca细胞增殖。miR-383-5p在Pca组织及Pca细胞中表达下调。65例Pca样本中，miR-383-5p的表达水平与THOR的表达呈负相关(r=-0.792,P<0.001)。下调PC3和LNCaP细胞中THOR表达后，miR-383-5p的表达水平显著提高。基因芯片检测结果表明，转染si-THOR的PC3细胞中miR-383-5p的表达显著增加。生物信息学分析发现，miR-383-5p可以通过互补序列与THOR相互作用。荧光素酶报告基因结果显示，miR-383-5p模拟物可使野生型THOR报告质粒的荧光素酶活性显著降低(P<0.05),而对突变型无显著影响。THOR通过靶向miR-383-5p调节IGF2BP1的表达影响Pca的增殖。结论 THOR通过海绵效应抑制miR-383-5p,促进Pca的进展。

关键词

前列腺癌 / 睾丸相关高度保守的致癌长链非编码RNA / 微小RNA-383-5p / 胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白1 / 竞争性内源性RNA / 细胞增殖 / 基因表达调控 / 海绵效应

基金资助

国家自然科学基金(81572702)