蟾蜍灵对转化生长因子-β1诱导的肾小管上皮细胞细胞外基质合成的影响

摘要

目的 探讨蟾蜍灵通过抑制Klotho甲基化减轻转化生长因子-β1（TGF-β1）诱导的肾小管上皮细胞（HK2细胞）细胞外基质合成的机制。方法 基于Pubchem和AutoDock分析核心靶点与蟾蜍灵的关系，并通过细胞实验进行验证。以HK2细胞为研究对象，采用细胞计数试剂盒-8（CCK-8）细胞毒性实验检测不同浓度蟾蜍灵对HK2细胞活力的影响。采用甲基化特异性PCR、Western blot法检测蟾蜍灵对TGF-β1诱导损伤的细胞Klotho启动子甲基化、纤维连接蛋白（FN）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、DNA甲基转移酶1（DNMT1）以及Klotho蛋白表达的影响。结果 分子对接结果显示，蟾蜍灵与靶点Klotho和DNMT1蛋白结合能力很强，结合能均为-9.7 kcal/mol。CCK-8检测结果表明，随着蟾蜍灵浓度的逐渐升高，HK2细胞存活率呈明显下降趋势，半数抑制浓度(IC₅₀)为371.7 nmol/L。甲基化特异性PCR结果显示，TGF-β1呈时间依赖性地增高Klotho启动子甲基化水平，降低非甲基化水平，蟾蜍灵则呈剂量依赖性地逆转TGF-β1上述效应。Western blot结果显示，蟾蜍灵以时间依赖性和剂量依赖性的方式抑制TGF-β1诱导的纤维化及甲基化指标，以及FN、α-SMA和DNMT1的蛋白表达，恢复Klotho的表达。结论 蟾蜍灵可能通过抑制DNMT1介导的甲基化修饰，恢复Klotho表达，发挥治疗慢性肾脏病的作用。

关键词

肾小管上皮细胞 / 细胞外基质 / 转化生长因子-β1 / Klotho启动子 / 甲基化 / 蟾蜍灵 / 慢性肾脏病 / DNA甲基转移酶1