艾司氯胺酮通过PINK1/Parkin通路减轻脓毒症小鼠急性肾损伤的作用机制

摘要

目的 探讨艾司氯胺酮通过调控PTEN诱导的激酶1(PINK1)/Parkin通路减轻脓毒症急性肾损伤(SA-AKI)模型小鼠的机制。方法 构建脓毒症小鼠模型，并分为模型组、艾司氯胺酮组(15 mg/kg)、艾司氯胺酮+自噬抑制剂组(15 mg/kg艾司氯胺酮+30 mg/kg 3-MA);另将接受相同手术操作但不结扎、穿刺盲肠的小鼠作为对照组。各组小鼠血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)含量采用全自动生化分析仪检测；各组小鼠血清白细胞介素(IL)-1β、IL-18、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测；各组小鼠肾脏组织病理形态采用苏木精-伊红(HE)染色观察，采用Paller评分评估肾损伤程度；各组小鼠肾组织细胞凋亡情况采用TUNEL染色法检测；线粒体及自噬小体采用透射电镜观察；各组小鼠肾组织中cleaved Caspase 3、PINK1及Parkin蛋白表达采用Western blot法检测。结果 与对照组相比，模型组小鼠肾小管扩张，上皮细胞脱落或肿胀，肾间质水肿、充血，线粒体体积减小，可见线粒体嵴被破坏，线粒体膜溶解，线粒体碎片及少量自噬小体，Paller评分较高，血清Scr、BUN、IL-1β、IL-18、TNF-α水平升高，肾组织细胞凋亡率及cleaved Caspase 3、PINK1、Parkin蛋白表达水平升高，差异均有统计学意义(P<0.05)。与模型组相比，艾司氯胺酮组小鼠肾小管排列比较整齐，肾组织病理形态改善显著，线粒体排列相对整齐，形态相对规则，线粒体空泡化改善，膜结构较完整、体积较大，可见较多自噬小体，Paller评分、血清Scr、BUN、IL-1β、IL-18、TNF-α、肾组织细胞凋亡率及cleaved Caspase 3蛋白表达水平下降，而PINK1、Parkin蛋白表达水平升高。使用自噬抑制剂干预后，艾司氯胺酮对脓毒症小鼠肾损伤的改善作用被减弱(P<0.05)。结论 艾司氯胺酮可能通过调控PINK1/Parkin通路缓解SA-AKI。

关键词

脓毒症 / 急性肾损伤 / 艾司氯胺酮 / 线粒体自噬 / PTEN诱导的激酶1 / Parkin蛋白 / 细胞凋亡 / 尿素氮