苦参碱通过靶向La相关蛋白1抑制线粒体氧化磷酸化诱导卵巢癌细胞凋亡的机制研究

摘要

目的 探讨苦参碱对卵巢癌细胞生物学功能的影响，并分析其对线粒体氧化磷酸化(OXPHOS)诱导的卵巢癌细胞凋亡的分子机制。方法 采用不同浓度的苦参碱(0、0.5、1.0和2.0μmol/L)分别处理卵巢癌细胞(CAOV3细胞)24、48和72 h。采用CCK-8检测细胞活力；采用EDU染色检测细胞增殖；采用Transwell检测细胞侵袭；采用流式细胞术检测细胞凋亡；采用Western blot检测La相关蛋白1(LARP1)蛋白水平。此外，检测细胞的线粒体耗氧率(OCR),计算细胞的基础OCR、最大OCR和三磷酸腺苷(ATP)产生水平。利用Starbase数据库预测LARP1与TFB2M mRNA结合情况，并通过RNA免疫沉淀(RIP)分析进行验证。随后将CAOV3细胞分为6组：Vector+NC shRNA组、OE-LARP1组、sh-TFB2M组、OE-LARP1+sh-TFB2M组、苦参碱+OE-LARP1组和苦参碱+sh-TFB2M组。检测细胞增殖、侵袭和凋亡水平，以及OCR和ATP生成水平。结果 苦参碱呈剂量依赖性显著抑制CAOV3细胞增殖和侵袭，诱导细胞凋亡(P<0.05)。苦参碱呈剂量依赖性显著抑制CAOV3细胞的基础OCR和最大OCR,降低ATP生成和线粒体膜电位(P<0.05)。苦参碱呈剂量依赖性显著抑制CAOV3细胞中LARP1蛋白表达(P<0.05),但对其mRNA水平无明显影响。在Anti-LARP1抗体下拉的RNA-蛋白复合物中TFB2M mRNA显著富集，LARP1通过与TFB2M mRNA结合促进TFB2M稳定性，上调TFB2M蛋白水平。过表达LARP1可增加CAOV3细胞OCR,促进ATP产生，升高线粒体膜电位(P<0.05);沉默TFB2M可抑制过表达LARP1对CAOV3细胞OCR、ATP产生及线粒体膜电位的促进作用(P<0.05);苦参碱处理可抑制LARP1过表达对CAOV3细胞OXPHOS的作用(P<0.05),促进沉默TFB2M对CAOV3细胞OXPHOS的作用(P<0.05)。过表达LARP1能显著抵消苦参碱对CAOV3细胞OXPHOS、增殖和侵袭的抑制作用，以及对细胞凋亡的促进作用(P<0.05)。沉默TFB2M可逆转LARP1过表达对CAOV3细胞的影响，进一步加强苦参碱对CAOV3细胞恶性生长的抑制作用(P<0.05)。结论 苦参碱通过靶向LARP1,调控LARP1/TFB2M轴介导的线粒体OXPHOS,抑制卵巢癌细胞增殖和侵袭，促进细胞凋亡。

关键词

卵巢肿瘤 / 苦参碱 / RNA结合蛋白质类 / La相关蛋白1 / TFB2M表达水平 / 氧化磷酸化 / 细胞增殖 / 细胞凋亡