护心康片通过AMPK/mTOR/p70S6K通路调控自噬改善大鼠慢性心力衰竭的作用机制

摘要

目的 探讨护心康片调控自噬改善大鼠慢性心力衰竭的作用机制。方法 采用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间串联质谱(UPLC-Q-TOF-MS/MS)技术从护心康片中鉴定出19个主要化学成分，并结合网络药理学方法构建“成分-靶点-通路”作用网络，筛选出其作用于心力衰竭的30个核心靶点。经基因本体论(GO)及京都基因和基因组百科全书(KEGG)通路富集分析发现这些靶点显著富集于AMP依赖的蛋白激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(AMPK/mTOR)自噬调控信号轴。在此基础上，通过结扎大鼠左冠状动脉前降支构建慢性心力衰竭模型，将48只大鼠随机分为空白组、模型组、卡托普利组(0.013 5 g/kg)以及护心康片低、中、高剂量组(0.41、0.82、1.64 g/kg),每组8只。连续给药4周后，检测血清中心房利钠肽(ANP)、B型脑钠尿肽(BNP)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6、IL-1β。采用Masson染色观察心肌病理改变，采用Western blot分析AMPK/mTOR/70 kDa核糖体蛋白S6激酶(AMPK/mTOR/p70S6K)信号通路蛋白表达，系统验证网络药理学预测结果。结果 网络药理学预测核心靶点与AMPK/mTOR自噬通路高度相关。动物实验结果显示，模型组较空白组出现心肌纤维断裂、排列紊乱，左心室扩张伴左室射血分数(LVEF)显著降低(P<0.05),血清BNP、ANP、TNF-α、IL-6、IL-1β及MDA水平显著升高，SOD活性显著降低(P<0.05)。Western blot结果显示，模型组心肌组织p-AMPK蛋白表达显著降低(P<0.01), p-mTOR、p-p70S6K、自噬标志物LC3-Ⅱ及p62蛋白表达显著升高(P<0.01)。护心康片高剂量组可显著改善心肌病理损伤，减轻心室重构，提高LVEF,降低血清炎症及氧化应激标志物水平；同时，显著上调p-AMPK蛋白表达(P<0.01),下调p-mTOR、p-p70S6K、LC3-Ⅱ及p62蛋白水平(P<0.01)。结论 护心康片所含多种活性成分可能通过作用于AMPK、mTOR等关键靶点，调控AMPK/mTOR/p70S6K信号通路，恢复心肌能量代谢稳态，促进自噬通路正常运行并缓解自噬流阻滞，从而减轻氧化应激与炎症反应，发挥心脏保护作用。

关键词

护心康片 / 慢性心力衰竭 / 自噬 / AMP依赖的蛋白激酶 / 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 / 70 kDa核糖体蛋白S6激酶 / 网络药理学 / 超高效液相色谱-四极杆-飞行时间串联质谱

基金资助

湖南省2023年度中医药科研计划项目(C2023047)