天冬多糖协同缺氧诱导因子-1α RNA干扰抑制肝癌血管形成的体内动物实验研究

摘要

目的 探讨天冬多糖（ASP）联合缺氧诱导因子-1α RNA干扰（HIF-1α RNAi）对裸鼠人肝癌细胞皮下移植瘤血管形成的影响。方法 将60只5周龄BALB/c雄性裸鼠随机分为对照组、HIF-1α RNAi组、协同组（采用HIF-1α RNAi+ASP干预），每组20只。对照组腋下接种LV-Ctrl-SK-Hep1细胞，其他2组接种LV-shHIF-1α-SK-Hep1细胞。接种12 d后，对照组和HIF-1α RNAi组给予磷酸盐缓冲液（PBS）灌胃，协同组给予ASP灌胃。每组随机抽取10只裸鼠，每3 d测量移植瘤直径，第33天取出移植瘤，测量其体积和质量；采用酶联免疫吸附测定（ELISA）检测血清血管内皮生长因子（VEGF）水平；采用免疫组织化学法和免疫印迹法检测血管形成相关蛋白表达水平。观察剩余30只裸鼠的生存期，并比较3组的生存率。结果 协同组和HIF-1α RNAi组移植瘤体积、质量以及血清VEGF水平均低于对照组，且协同组较HIF-1α RNAi组更低，差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。免疫组织化学和免疫印迹法检测结果显示，协同组和HIF-1α RNAi组移植瘤的HIF-1α、VEGF、CD34、磷酸化丝氨酸/苏氨酸激酶B(p-AKT)和磷酸化细胞外调节蛋白激酶（p-ERK）蛋白表达水平均低于对照组，差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）；协同组以上蛋白表达水平较HIF-1α RNAi组更低，差异有统计学意义（P<0.01）。协同组和HIF-1α RNAi组裸鼠生存率均高于对照组，且协同组生存率高于HIF-1α RNAi组，差异均有统计学意义（P<0.05）。结论 ASP联合HIF-1α RNAi对裸鼠皮下移植瘤生长具有显著的抑制作用，其机制可能与ASP协同HIF-1α RNAi抑制了肝癌细胞HIF-1α/VEGF通路介导的血管形成相关。

关键词

天冬多糖 / 缺氧诱导因子-1α / 肝细胞癌 / RNA干扰 / 血管生成 / 信号通路 / 丝氨酸/苏氨酸激酶B / 细胞外调节蛋白激酶

基金资助

国家自然科学基金青年项目（81703868）; 安徽省卫生健康科研项目一般项目（AHWJ2023A20434）; 安徽省中医药传承创新科研项目（2024CCCX231）; 安徽省高校科研项目重点项目（2022AH050496）