三叶苷对破骨细胞分化影响的研究

摘要

目的 基于网络药理学预测并结合体外细胞实验，评估三叶苷对破骨细胞分化与功能形成的影响，并探讨其潜在作用机制。方法 基于GSE235773数据集筛选破骨分化相关差异基因，并与三叶苷预测靶点取交集构建蛋白互作网络；结合通路富集分析及分子对接筛选关键靶点。分离小鼠骨髓来源巨噬细胞（BMMs）并诱导其向破骨细胞分化。采用细胞活力检测（CCK-8）、抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色、F-肌动蛋白（F-actin）环染色及蛋白质免疫印迹（Western blot）检测三叶苷的作用，并通过外源性补充前列腺素E₂（PGE₂）及环氧化酶-2（COX2）小干扰RNA进行功能性验证。结果 共获得17个潜在作用靶点，其中前列腺素内过氧化物合酶2（Ptgs2,编码COX2）在蛋白互作网络中处于核心位置。分子对接显示，三叶苷与COX2具有较好的结合能力（结合能-7.4 kcal/mol）。体外实验结果显示，三叶苷在无明显细胞毒性范围内可剂量依赖性抑制RANKL诱导的破骨细胞形成及F-actin环结构，并下调破骨细胞相关标志蛋白基质金属蛋白酶9（MMP9）、耐酒石酸酸性磷酸酶5（ACP5）及COX2的表达。外源性补充PGE₂可部分逆转三叶苷上述抑制效应。COX2敲低可显著抑制破骨相关蛋白表达，且在COX2沉默条件下三叶苷未表现出明显的进一步抑制作用。结论 三叶苷在体外条件下可抑制破骨细胞分化及其功能形成，该作用至少部分依赖COX2信号轴。

关键词

三叶苷 / 破骨细胞 / 细胞分化 / 环氧化酶2 / 前列腺素E₂ / 网络药理学 / 分子对接 / 骨髓巨噬细胞

基金资助

江苏省中医药科技发展计划专题研究项目(ZT202117); 扬州市科技计划项目(YZ2023266)