载miR-144抑制剂的脂质体杂合红细胞膜纳米药物的构建及初步评价

摘要

目的 构建载微小RNA-144(miR-144)抑制剂的脂质体杂合红细胞膜(LHRM)纳米递送系统，评价其理化性质、生物相容性、体内循环特性以及体外递送能力。方法 采用低渗裂解法提取红细胞膜，薄膜水化法制备脂质体，并按不同质量比融合构建LHRM纳米颗粒。通过动态光散射(DLS)、Zeta电位及透射电镜(TEM)对纳米颗粒进行表征，并利用DiO、DiI荧光标记实验验证膜融合。通过DiI荧光标记纳米颗粒，并经尾静脉注射至C57BL/6小鼠体内，评价其体内循环情况。以小鼠红白血病细胞(MEL)为体外模型，观察不同配比纳米颗粒的细胞递送能力及细胞毒性，并进一步采用Western blot检测miR-144抑制剂递送后NF-E2相关因子2(Nrf2)蛋白的表达变化。结果 成功构建LHRM纳米载体，其粒径较红细胞膜显著增加，呈规则核壳结构，荧光共定位实验表明膜融合成功。不同配比比较显示，当红细胞膜与脂质体质量比为6∶1时，细胞递送效果最佳。初步测得载miR-144抑制剂的LHRM和脂质体包封率分别为(75.05±5.49)%和(60.23±6.85)%。体内实验中，LHRM组较脂质体显著延缓了血液荧光衰减趋势。MTT结果初步提示LHRM对MEL细胞具有较好的生物相容性，细胞毒性较小；Western blot分析表明，MEL细胞经载miR-144抑制剂的LHRM处理后，可提升细胞的Nrf2蛋白水平。结论 构建的LHRM纳米递送系统具有良好的结构稳定性、生物相容性及递送能力，并在初步体内实验中表现出较脂质体更优的血液荧光衰减趋势。该递送系统的成功构建为成功递送miR-144抑制剂、改善β-地中海贫血细胞的氧化应激提供了生物材料。

关键词

β-地中海贫血 / 脂质体 / 红细胞膜 / 微小RNA / 纳米颗粒 / 药物递送系统 / NF-E2相关因子2 / 基因治疗

基金资助

国家自然科学基金项目（22472146）; 广西出生缺陷防治基础研究重点实验室（广西壮族自治区妇幼保健院）开放课题支持项目（GXWCH-ZDKF-2023-16）; 国家级大学生创新创业训练计划项目（202511117012）