清化除幽汤通过调节AMPK/ULK1通路影响慢性萎缩性胃炎大鼠胃黏膜铁死亡的机制研究

摘要

目的 探讨清化除幽汤对慢性萎缩性胃炎大鼠的改善作用，并基于腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/UNC-51样激酶1(ULK1)通路分析其作用机制。方法 实验大鼠随机分为Control组和造模组，造模组自由饮用N-甲基-N-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)并灌胃水杨酸钠联合饥饱失常建立慢性萎缩性胃炎大鼠模型。造模完成后，将模型大鼠随机分为CAG组、QHCY-L组、QHCY-M组、QHCY-H组、MLD组，每组12只。QHCY-L组、QHCY-M组、QHCY-H组大鼠分别按照7.5、15.0、30.0 g/kg(以生药含量计)灌胃给予清化除幽汤，MLD组按照1.4 g/kg灌胃给予摩罗丹，所有组别干预1次/d，连续8周。采用酶联免疫吸附法(ELISA)试剂盒测定血清胃蛋白酶原Ⅰ(PGⅠ)、胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)、胃泌素(GAS)、胃动素(MTL)、胃泌素17(G-17)水平和胃黏膜谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)、铁离子(Fe2+)、白细胞介素(IL)-6、IL-8、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平，并计算PGⅠ/PGⅡ;使用pH计测定胃液pH值，使用试剂盒测定胃蛋白酶活性;采用实时定量聚合酶链式反应(PCR)测定胃黏膜酰基辅酶A合成酶长链家族成员4(ACSL4)、溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、铁蛋白重链1(FTH1)的mRNA水平;采用苏木精-伊红(HE)染色检查胃黏膜组织病变，采用免疫印迹法测定胃黏膜p-AMPK、AMPK、p-ULK1、ULK1蛋白水平。结果 与Control组比较，CAG组PGⅠ、PGⅠ/PGⅡ、GAS、MTL、G-17、胃蛋白酶活性，胃黏膜GSH，以及SLC7A11、GPX4、FTH1的mRNA水平降低，PGⅡ，胃液pH值，胃黏膜MDA、Fe2+、IL-6、IL-8、TNF-α水平，ACSL4 mRNA，以及p-AMPK、p-ULK1蛋白水平升高;与CAG组比较，QHCY-L、QHCY-M、QHCY-H组和MLD组PGⅠ、PGⅠ/PGⅡ、GAS、MTL、G-17、胃蛋白酶活性，胃黏膜GSH，以及SLC7A11、GPX4、FTH1的mRNA水平升高，PGⅡ，胃液pH值，胃黏膜MDA、Fe2+、IL-6、IL-8、TNF-α水平，ACSL4 mRNA，以及p-AMPK、p-ULK1蛋白水平降低;与QHCY-L组比较，QHCY-M、QHCY-H组PGⅠ、PGⅠ/PGⅡ、GAS、MTL、G-17、胃蛋白酶活性，胃黏膜GSH，以及SLC7A11、GPX4、FTH1的mRNA水平升高，PGⅡ，胃液pH值，胃黏膜MDA、Fe2+、IL-6、IL-8、TNF-α水平，ACSL4 mRNA，以及p-AMPK、p-ULK1蛋白水平降低;与QHCY-M组比较，QHCY-H组PGⅠ、PGⅠ/PGⅡ、GAS、MTL、G-17、胃蛋白酶活性，胃黏膜GSH,SLC7A11、GPX4、FTH1的mRNA水平升高，PGⅡ，胃液pH值，胃黏膜MDA、Fe2+、IL-6、IL-8、TNF-α水平，ACSL4 mRNA，以及p-AMPK、p-ULK1蛋白水平降低;上述组间差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 清化除幽汤能够恢复慢性萎缩性胃炎大鼠胃黏膜功能，改善胃pH值及胃蛋白酶活性，缓解胃黏膜炎症损伤及脂质过氧化反应，抑制胃黏膜细胞铁死亡，其机制可能与调节AMPK/ULK1通路有关。

关键词

清化除幽汤 / 慢性萎缩性胃炎 / 腺苷酸活化蛋白激酶 / UNC-51样激酶1 / 铁死亡 / 胃黏膜 / 胃蛋白酶活性 / 脂质过氧化反应

基金资助

河北中医药管理局项目(2022653)