慢性吗啡诱导HEK293细胞GIRK1和GIRK2膜表达下调

摘要

【目的】利用人胚胎肾细胞293(HEK293)观察G蛋白门控内向整流钾离子通道（GIRK）亚单位GIRK1和GIRK2在吗啡耐受后的表达和分布变化。【方法】使用HEK293细胞转染慢病毒pLV-CMV-GIRK1-T2A-GIRK2-P2A-MOR，构建过表达GIRK1、GIRK2和μ阿片受体（MOR）的稳转HEK293细胞，使用吗啡（1μmol/L,24 h）处理该稳转细胞，构建吗啡耐受HEK293细胞模型。细胞免疫荧光检测细胞模型中MOR与GIRK1和GIRK2的分布及共定位情况。ELISA检测cAMP含量变化确定建立吗啡耐受HEK293细胞模型。细胞免疫荧光和免疫印迹法检测吗啡耐受后GIRK1和GIRK2的分布及蛋白水平变化。多功能酶标仪测量荧光强度检测吗啡耐受后细胞膜电位水平变化。【结果】在稳转HEK293细胞中，免疫荧光化学显示GIRK1和GIRK2主要在胞膜上表达，少量在胞浆中，GIRK1和GIRK2与MOR共定位，且GIRK1和GIRK2共定位。与对照组相比，吗啡处理1 h组cAMP显著降低（1.42±0.07 vs.0.72±0.12,P=0.001 0），吗啡处理24 h组cAMP出现显著升高（0.72±0.12 vs.1.98±0.17,P=0.000 5）。荧光双染显示吗啡处理24 h后，吗啡耐受组胞浆中GIRK1(13.76±7.67 vs. 63.72±16.02,P<0.000 1)和GIRK2(7.16±2.61vs.32.92±7.67,P=0.002 9)显著增加。免疫印迹法显示吗啡耐受后膜蛋白GIRK1(1.11±0.14 vs.0.85±0.01,P=0.004 5)和GIRK2(1.32±0.02 vs.0.86±0.08,P=0.000 1)的表达显著下调。膜电位检测显示，吗啡耐受细胞的超极化反应显著减弱（-15.53±0.12）%vs.(-8.17±0.11)%,P<0.000 1。【结论】慢性吗啡处理能够诱导稳转HEK293细胞膜GIRK1和GIRK2表达下调。

关键词

吗啡 / 耐受 / 人胚胎肾细胞293 / G蛋白门控内向整流钾离子通道亚单位1 / G蛋白门控内向整流钾离子通道亚单位2