中耳胆脂瘤中lncRNA的m⁶A修饰（英文）

摘要

目的：中耳胆脂瘤是一种非肿瘤性疾病，通常会引起听力丧失、骨质破坏和其他严重并发症。尽管手术是主要的治疗方法，但其复发率较高。因此，探讨胆脂瘤的分子机制对寻找新的治疗方法具有重要意义。本文旨在探究长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)中N6-甲基腺嘌呤(N6-methyladenosine,m6A)甲基化参与中耳胆脂瘤的生物学功能及相关通路。方法：利用lncRNA m6A转录组芯片分析中耳胆脂瘤组织(n=5)和正常耳后皮肤组织(n=5)的m6A修饰模式。采用基因本体(Gene Ontology,GO)和京都基因与基因组数据库(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)途径分析中耳胆脂瘤发病的可能生物学功能和信号通路。并运用甲基化RNA免疫沉淀(methylated RNA immunoprecipitation,MeRIP)-PCR验证中耳胆脂瘤和正常皮肤组织中的lncRNA m6A修饰。结果：与正常皮肤对照组相比，中耳胆脂瘤组织中m6A甲基化修饰了1 525个lncRNAs(高甲基化1 048个，低甲基化477个)，差异有统计学意义[差异倍数(fold change,FC)≥3或<1/3,P<0.05]。GO富集分析表明：高甲基化的lncRNA参与蛋白磷酸酶抑制剂活性、神经元间突触和α-氨基-3-羟基-5-甲基-4-异恶唑丙酸(α-amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxazole propionic acid,AMPA)受体活性的调节。低甲基化lncRNA参与mRNA甲基转移酶活性、分泌颗粒膜和mRNA甲基化。KEGG分析表明：高甲基化lncRNAs主要与5条通路相关，包括Hedgehog信号通路、病毒蛋白与细胞因子及细胞因子受体的相互作用、丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPK)信号通路、细胞因子-细胞因子受体相互作用和心肌细胞的肾上腺素能信号通路。低甲基化lncRNA主要与4种途径相关：肾细胞癌、肿瘤坏死因子信号通路、癌症的转录失调以及细胞因子-细胞因子受体相互作用。此外，通过MeRIP-PCR验证了NR＿033339、NR＿122111、NR＿130744和NR＿026800中m6A甲基化水平的改变，与微距阵分析相一致。并且通过realtime PCR验证了MAPK信号通路的关键基因MAPK1和NF-κB表达量显著上调。结论：本研究揭示了中耳胆脂瘤中lncRNA的m6A修饰模式，提示lncRNA m6A修饰在胆脂瘤病因学中的研究方向，为中耳胆脂瘤的治疗提供了潜在的靶点。

关键词

长链非编码RNA / m6A修饰 / 中耳胆脂瘤