PTHrP促进RANKL诱导巨噬细胞分化为破骨细胞参与中耳胆脂瘤骨破坏

摘要

目的：骨质进行性吸收破坏是中耳胆脂瘤最重要的临床特征之一，可导致一系列颅内外并发症，而目前中耳胆脂瘤骨破坏的机制尚未明确。本研究旨在探究甲状旁腺激素相关蛋白(parathyroid hormone-related protein,PTHrP)参与中耳胆脂瘤骨破坏的机制。方法：收集后天性中耳胆脂瘤患者的25例胆脂瘤标本和13例外耳道正常皮肤组织标本。采用免疫组织化学染色方法检测PTHrP、核因子κB受体活化因子配体(receptor activator for nuclear factor-kappa B ligand,RANKL)和骨保护素(osteoprotegerin,OPG)在中耳胆脂瘤和外耳道正常皮肤组织中的表达，抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)染色法检测中耳胆脂瘤和外耳道正常皮肤组织中是否存在TRAP阳性多核巨噬细胞。选取小鼠单核巨噬细胞RAW264.7细胞进行干预，分为RANKL干预组和PTHrP+RANKL共同干预组，采用TRAP染色法检测2组破骨细胞的生成情况，实时聚合酶链反应(real-time polymerase chain reaction,real-time PCR)检测干预后2组破骨细胞相关基因TRAP、组织蛋白酶K(cathepsin K,CTSK)和活化T细胞核因子1(nuclear factor of activated T cell cytoplasmic 1,NFATc1)的mRNA表达水平，骨吸收陷窝实验检测2组破骨细胞的骨吸收功能。结果：免疫组织化学染色结果显示，PTHrP和RANKL在中耳胆脂瘤组织中的表达均显著增高，OPG表达降低(均P<0.05)，且PTHrP的表达与RANKL、RANKL/OPG比值均呈显著正相关，与OPG表达呈显著负相关(分别r=0.385、r=0.417、r=-0.316，均P<0.05)。同时，PTHrP、RANKL的表达水平与中耳胆脂瘤的骨破坏程度均呈显著正相关(分别r=0.413、r=0.505，均P<0.05)。TRAP染色结果显示中耳胆脂瘤上皮周围基质中有大量TRAP阳性细胞，并存在细胞核数量为3个或3个以上的TRAP阳性破骨细胞。RANKL或PTHrP+RANKL联合干预5 d后，与RANKL干预组相比，PTHrP+RANKL联合干预组的破骨细胞数量显著增加(P<0.05)，且破骨细胞相关基因TRAP、CTSK和NFATc1的mRNA表达水平均升高(均P<0.05)。骨吸收陷窝扫描电镜结果显示RANKL干预组、PTHrP+RANKL联合干预组的骨片表面均形成骨吸收陷窝；与RANKL干预组相比，PTHrP+RANKL联合干预组的骨片表面骨吸收陷窝数量显著增加(P<0.05)，面积也更大。结论：PTHrP可能通过促进RANKL诱导胆脂瘤组织周围基质中的巨噬细胞分化为破骨细胞，参与中耳胆脂瘤骨破坏。

关键词

甲状旁腺激素相关蛋白 / 中耳胆脂瘤 / 核因子κB受体活化因子配体 / 骨保护素 / 破骨细胞 / 巨噬细胞