大鼠延髓背角A1型反应性星形胶质细胞激活参与三叉神经痛慢性化

摘要

目的：星形胶质细胞激活是慢性疼痛中的重要环节，本研究旨在观察三叉神经痛大鼠模型中延髓背角A1型反应性星形胶质细胞活化情况，并探究其引起中枢敏化的机制。方法：将雄性SD大鼠随机分为假手术(sham)组和眶下神经慢性缩窄性损伤(chronic constriction injury of infraorbital nerve,ION-CCI)组。分别于造模前1 d及造模后第1、3、7、10、14天进行大鼠面部机械痛阈、热敏潜伏期测定。疼痛行为学检测完成后，采用免疫荧光染色检测大鼠延髓背角胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)的表达，对GFAP、补体3(complement 3,C3)/S100A10、4’, 6-二脒基-2-苯基吲哚(4’, 6-diamidino-2-phenylindole,DAPI)进行免疫荧光共定位分析。取原代星形胶质细胞培养，并将其随机分为空白对照组和二氢红藻氨酸(dihydrokainic acid,DHK)组。DHK组加入1 mmol/L的星形胶质细胞激活抑制剂DHK，使用钙离子荧光探针Fura-2/AM对2组细胞进行钙荧光染色，连续观察高钾刺激下2组细胞的钙波活动差异。采用蛋白质印迹法检测C3的蛋白质表达水平。结果：ION-CCI组大鼠机械痛阈和热敏潜伏期均明显低于sham组(均P<0.05)。ION-CCI组延髓背角存在大量GFAP表达阳性的星形胶质细胞，GFAP荧光强度明显强于sham组(P<0.05)。GFAP和C3/S100A10共定位于延髓背角星形胶质细胞。与sham组比较，ION-CCI组C3的荧光强度和蛋白质表达均明显增加(均P<0.05)。与空白对照组比较，DHK组C3蛋白质表达水平明显下调(P<0.05)。在第60秒给予高钾刺激后，空白对照组和DHK组的钙荧光强度均明显增加，且空白对照组的钙荧光峰值和钙荧光升高幅度均高于DHK组，差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论：三叉神经痛模型大鼠延髓背角A1型反应性星形胶质细胞明显增多，其可能通过影响钙波活动参与三叉神经痛的中枢敏化。

关键词

三叉神经痛 / A1型反应性星形胶质细胞 / 延髓背角 / 钙波