中期保存液和甘油保存的血清HBsAg阳性供体角膜中HBsAg的表达和定位

摘要

目的：中国角膜移植供体缺口巨大，可通过角膜成分移植来扩大供体角膜来源。本研究旨在通过观察采用不同储存介质保存的血清乙型肝炎表面抗原（hepatitis B surface antigen,HBs Ag）阳性捐献者角膜中HBs Ag的表达和分布，以评估板层角膜移植的可行性和安全性。方法：本研究的研究对象为2019年12月至2021年3月间临床捐献的保存在中南大学湘雅三医院眼库的10枚角膜（来自6例捐献者）。采用酶联免疫吸附分析的方法检测血清HBs Ag的表达，聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR）法检测血清HBs Ag阳性捐献者血中乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）DNA滴度，免疫荧光染色检测角膜中的HBs Ag的表达及其在角膜各层的定位，对血中HBV DNA滴度和角膜中HBs Ag荧光强度进行相关性分析。结果：4枚来自2例血清HBs Ag阳性捐献者的角膜、1枚来自1例血清HBs Ag阴性捐献者的角膜均短期（<2周）保存在中期保存液中，2枚来自1例血清HBs Ag阳性捐献者的角膜和2枚来自1例血清HBs Ag阳性捐献者的角膜分别在甘油中保存1个月和1年，1枚来自1例血清HBs Ag阴性捐献者的角膜在甘油中保存1年。免疫荧光染色结果显示：采用中期保存液短期（<2周）保存的2枚角膜上皮层和1枚角膜内皮层、甘油保存1年的1枚角膜上皮细胞均可见HBs Ag阳性信号。免疫荧光染色半定量分析结果显示：角膜上皮层和内皮层中HBs Ag荧光强度差异有统计学意义（P=0.012），不同捐献者及保存方法的角膜上皮中HBs Ag荧光强度的差异无统计学意义（P>0.05）。血中HBV DNA滴度与角膜上皮中的HBs Ag阳性表达呈正相关（R²=0.707,P=0.036）。结论：HBs Ag血清阳性捐献者的供体角膜存放于中期保存液或在甘油中长期保存后，上皮层或内皮层仍有HBs Ag的阳性表达，但角膜基质层中均无HBs Ag的阳性表达。血中HBV DNA滴度高表达的捐献者，其角膜中HBs Ag表达阳性的可能性越高。本研究为进一步研究HBs Ag阳性供体角膜用于板层角膜移植的可能性奠定了基础。

关键词

角膜 / 板层角膜移植 / 乙型肝炎病毒 / 乙型肝炎病毒表面抗原 / 乙型肝炎病毒表面抗体 / 上皮层 / 内皮层 / 基质层