EZH2通过EMT促进食管鳞状细胞癌的恶性生物学行为

摘要

目的：食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)的发病机制复杂，预后较差。近年来，上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)在肿瘤发生和发展中的作用受到越来越多的关注，同时zeste基因增强子同源物2(enhancer of zeste homolog 2,EZH2)在多种肿瘤中表达水平异常，可能与EMT过程密切相关。本研究旨在检测ESCC细胞和组织中EZH2和EMT标志物的表达水平及其相关性，评估EZH2基因敲减对ESCC细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响，并探讨EZH2促进ESCC恶性生物学行为的机制。方法：通过生物信息学方法分析EZH2在ESCC中的表达水平。利用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)敲减ESCC细胞系EC109、EC9706中EZH2基因的表达后，通过细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)、细胞划痕和Transwell实验评估2种ESCC细胞的增殖、侵袭及迁移能力，并利用蛋白质印迹法和实时荧光定量PCR(real time fluorogenic quantitative PCR,RT-qPCR)检测EZH2、上皮钙黏素(E-cadherin,E-cad)及波形蛋白(vimentin,Vim)的蛋白质和mRNA表达情况。收集石河子大学第一附属医院2010至2016年间收集的70例ESCC组织及其中40例配对癌旁组织，通过免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)染色分析ESCC组织中EZH2、E-cad和Vim的蛋白质表达水平。结合临床病理参数和患者的生存情况，分析三者与ESCC患者临床进展及预后的关系。结果：生物信息学分析结果显示EZH2在ESCC中高表达(P<0.001)，并且EZH2高表达组的预后更差(P<0.001)。CCK-8、细胞划痕和Transwell实验结果表明，相较于对照组，敲减EZH2的ESCC细胞的增殖、侵袭、迁移能力均显著减弱(均P<0.001)，且EMT的间充质标志物Vim的蛋白质和mRNA表达水平均显著降低，上皮标志物E-cad的蛋白质和mRNA表达水平均显著升高(均P<0.05)。IHC染色分析显示与癌旁组织相比，ESCC组织中EZH2和Vim高表达，而E-cad低表达。Kaplan-Meier生存分析显示EZH2和Vim低表达及E-cad高表达的患者的生存期均显著更长(均P<0.05)。结论：EZH2通过EMT促进ESCC的恶性生物学行为，其表达水平的升高提示ESCC患者较差的预后。

关键词

食管鳞状细胞癌 / zeste基因增强子同源物2 / 上皮-间充质转化 / 恶性生物学行为 / 预后