Kazinol B通过抑制JNK信号通路减轻缺氧/复氧诱导的肝细胞损伤

摘要

目的：肝细胞缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)损伤是肝移植过程中肝细胞损伤的关键病理过程，Kazinol B具有抗炎、抗凋亡及代谢调节作用，但其在H/R肝损伤中的保护机制尚不明确。本研究旨在探讨Kazinol B对H/R诱导的肝细胞损伤的保护作用及其机制。方法：制作健康成年雄性SD大鼠H/R模型，体外培养肝细胞并建立H/R模型。Kazinol B(0～100μmol/L)处理肝细胞，评估其细胞毒性和保护作用。采用细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)和乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)释放实验评估细胞活性；蛋白质印迹法分析凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤因子2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2关联死亡启动子(Bcl-2 associated death promoter,Bad)和活化半胱氨酸蛋白酶-3(cleaved caspase-3)的表达；荧光探针法检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平，酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)分析炎症因子[肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)]的变化；脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TdT-mediated nick end labeling,TUNEL)染色法检测细胞凋亡。结果：在0至50μmol/L范围内的Kazinol B作用下，肝细胞活性无显著变化，仅在100μmol/L时有抑制作用(P<0.05)。0.1～20μmol/L Kazinol B可提高细胞存活率，减少LDH释放和细胞凋亡率，并降低DNA损伤(均P<0.001)。10μmol/L Kazinol B显著抑制Bad和cleaved caspase-3的表达(均P<0.05)，提高Bcl-2水平(P<0.01)。此外，Kazinol B呈剂量依赖性降低ROS和炎症因子(TNF-α和IL-1β)的水平(均P<0.01)。在细胞和大鼠模型中，Kazinol B抑制c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)信号通路的激活，而对细胞外信号调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinase,ERK)信号通路无显著影响(P>0.05)。TUNEL染色显示JNK激动剂茴香霉素部分抵消了Kazinol B对细胞凋亡的保护作用(P<0.01)。结论：Kazinol B通过抑制JNK信号通路减轻肝细胞H/R损伤，其保护作用与抑制氧化应激和炎症反应有关，表明Kazinol B在肝保护中具有潜在的应用价值。

关键词

Kazinol B / 肝细胞 / 缺氧/复氧 / 细胞保护 / 抗氧化应激