MiR-224-5p通过Bcl-2介导自噬调控结直肠癌化疗耐药（英文）

摘要

目的：奥沙利铂（oxaliplatin,OXA）和5-氟尿嘧啶（5-fluorouracil,5-FU）是结直肠癌（colorectal cancer,CRC）的2种化疗药物。微小RNA（microRNA,miRNA,miR）在各种肿瘤的化疗耐药性发展中起关键作用。MiR-224-5p调节CRC化疗耐药性的机制尚不清楚。本研究旨在探讨miR-224-5p对化疗耐药性CRC细胞的影响及其相关机制。方法：在高通量基因表达（Gene Expression Omnibus,GEO）数据库中下载CRC数据集GSE190951和GSE119481，分别分析2个数据集中对OXA或5-FU敏感组和耐药组患者的差异表达miRNA并最终确定目标miR-224-5p；构建HCT15-OXR,HCT15-5-FU,SW480-OXR,SW480-5-FU耐药细胞株。采用瞬时转染技术在CRC细胞系HCT15-OXR、 HCT15-5-FU、 SW480-OXR、 SW480-5-FU中分别转染miR-224-5p模拟物（mimic）、 miR-224-5p抑制物（inhibitor）及其相应的阴性对照（control mimic、control inhibitor），转染后用不同浓度的5-FU或OXA处理各耐药细胞，采用细胞计数试剂盒-8（cell counting kit-8,CCK-8）法检测各耐药细胞株的半数抑制浓度(50%inhibitory concentration,IC₅₀)变化情况。采用CCK-8和克隆形成实验检测各转染细胞的增殖变化；采用实时荧光定量PCR（real-time polymerase chain reaction,real-time PCR）和/或蛋白质印迹法检测各组细胞中miR-224-5p、LC3、P62的表达水平；自噬双荧光病毒实验验证各组细胞的自噬流改变；采用在线生物信息学数据库TargetScan 8.0,miRtarbase,miRPathDB及HADb database预测miR-224-5p的靶向基因B细胞淋巴瘤因子2（B-cell lymphoma-2,Bcl-2）。采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-224-5p与Bcl-2的靶向关系。结果：化疗耐药性CRC细胞表现出miR-224-5p表达下调，而miR-224-5p表达上调则增强CRC细胞的化疗敏感性。暴露于OXA或5-FU显著增加化疗耐药性CRC细胞的自噬作用，但是miR-224-5p的上调可消除这种效应。双荧光素酶报告基因分析证实miR-224-5p对Bcl-2有直接靶向作用。结论：MiR-224-5p通过其对Bcl-2介导的自噬作用在CRC化疗耐药性发展中发挥作用。

关键词

结直肠癌 / 化疗耐药 / 自噬 / miR-224-5p / B细胞淋巴瘤因子2