EGR2通过促进小胶质细胞吞噬作用维持神经病理性疼痛（英文）

摘要

目的：神经病理性疼痛(neuropathic pain,NP)是临床上最常见的慢性疼痛之一，其治疗方法效果有限。外周神经损伤会激活脊髓小胶质细胞，并影响其炎症反应和吞噬作用等功能，进而促进NP的发展。目前，NP的研究主要集中在小胶质细胞的炎症反应，对其吞噬功能的研究相对较少。早期生长反应因子2(early growth response factor 2,EGR2)可调节小胶质细胞的吞噬功能，然而其在NP中的具体作用尚未明确。本研究旨在探讨EGR2对小胶质细胞吞噬功能的调节作用及其在NP中的作用，以期寻找行之有效的治疗靶点。方法：选用健康成年雄性SD大鼠，建立坐骨神经慢性压迫损伤(chronic constriction injury,CCI)模型，并在术后第1、3、7、10、14天观察大鼠疼痛行为学变化，以验证模型的成功建立。采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,RT-qPCR)、蛋白质印迹法及免疫荧光染色法，评估脊髓中EGR2的时间和空间表达情况。进一步对大鼠行脊髓内注射腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)过表达EGR2基因，通过疼痛行为学测定，探究从基因水平上干预EGR2对NP的影响。在动物和细胞水平分别进行CCI与脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)建模后，通过RT-qPCR和荧光乳胶颗粒检测小胶质细胞吞噬功能的变化。在证实小胶质细胞吞噬功能参与NP后，通过AAV于动物和细胞水平过表达EGR2，并对小胶质细胞吞噬功能进行检测，以明确EGR2对小胶质细胞吞噬功能的调节作用。最后，采用真核转录组测序筛选差异mRNA，并进行基因本体(Gene Ontology,GO)和京都基因和基因组数据库(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)通路分析，以探索EGR2可能的下游分子。结果：CCI模型能成功诱导NP。大鼠CCI造模后，脊髓中EGR2表现出与NP发展趋势一致的表达上调。脊髓内注射AAV以过表达EGR2后实验结果显示，小胶质细胞的吞噬功能及大鼠的疼痛超敏反应均增强。在动物和细胞模型中，CCI和LPS刺激后脊髓小胶质细胞的吞噬功能均增强。在动物和细胞模型中过表达EGR2后，脊髓小胶质细胞的吞噬功能增强。差异mRNA筛选和GO/KEGG通路分析结果显示：在EGR2过表达后的CCI大鼠脊髓中，与小胶质细胞吞噬功能和疼痛相关的大量基因均表达上调，Lag3很有可能为EGR2的下游靶点。结论：上调EGR2可通过增强脊髓背角小胶质细胞吞噬功能参与NP的维持。

关键词

神经病理性疼痛 / 脊髓背角 / 早期生长反应因子2 / 小胶质细胞 / 吞噬功能