理气活血滴丸通过抑制凋亡和坏死样凋亡通路缓解低氧诱导的人心脏微血管内皮细胞损伤

摘要

目的：人心脏微血管内皮细胞(human cardiac microvascular endothelial cells,HCMEC)损伤会破坏心肌微循环功能，进一步诱发冠心病等重大心血管事件，严重威胁人类健康。因此探讨低氧诱导的HCMEC损伤机制具有重要意义。本研究探讨理气活血滴丸对低氧诱导的HCMEC损伤的作用及作用机制。方法：将HCMEC低氧培养24 h建立细胞低氧损伤模型。将HCMEC分为正常对照组、低氧组、低氧+理气活血滴丸低剂量组、低氧+理气活血滴丸中剂量组、低氧+理气活血滴丸高剂量组和低氧+丹酚酸B(阳性对照)组。采用细胞增殖与毒性检测试剂3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-5-(3-羧甲氧基苯基)-2-(4-磺苯基)-2H-四唑盐[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium,MTS]检测细胞活力；采用乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)试剂盒检测细胞LDH释放率；采用丙二醛(malondialdehyde,MDA)试剂盒检测细胞MDA含量；采用超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)、过氧化氢酶(catalase, CAT)、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3(cysteinyl aspartate specific proteinase 3,caspase-3)和半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶8(cysteinyl aspartate specific proteinase 8,caspase-8)试剂盒分别检测细胞SOD、CAT、caspase-3和caspase-8活性；采用流式细胞术检测细胞凋亡率；采用蛋白质印迹法检测细胞坏死样凋亡相关蛋白质：受体相互作用蛋白激酶1(receptor-interacting kinase 1,RIPK1)、磷酸化受体相互作用蛋白激酶1(phosphorylated receptor-interacting protein kinase 1,p-RIPK1)、受体相互作用蛋白激酶3(receptor-interacting protein kinase 3, RIPK3)、磷酸化受体相互作用蛋白激酶3(phosphorylated receptor-interacting protein kinase 3,p-RIPK3)、混合谱系激酶结构域样蛋白(mixed lineage kinase domain-like protein,MLKL)、磷酸化混合谱系激酶结构域样蛋白(phosphorylated mixed lineage kinase domain-like protein,p-MLKL)。结果：与正常对照组比较，低氧组细胞活力显著降低(P<0.01)，细胞内MDA含量显著升高(P<0.05),CAT、SOD活力均显著下降(均P<0.05)，细胞凋亡率明显增加(P<0.01),p-RIPK1、p-RIPK3、p-MLKL水平均增加(均P<0.05)。与低氧组比较，低氧+理气活血滴丸高剂量组细胞活力显著提升(P<0.01)，并且细胞内MDA含量显著降低(P<0.05)，细胞内CAT活性显著升高(P<0.05)，坏死样凋亡相关蛋白质水平显著降低(均P<0.05)。结论：理气活血滴丸对低氧诱导的HCMEC损伤具有保护作用，其机制涉及减轻低氧诱导的氧化应激，进而减少HCMEC凋亡和坏死样凋亡。

关键词

理气活血滴丸 / 人心脏微血管内皮细胞 / 低氧 / 氧化应激 / 凋亡 / 坏死样凋亡