穿刺组织浸洗液在非小细胞肺癌的EGFR基因突变检测中的应用

摘要

目的：非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)的精准靶向治疗需要基于基因突变的分子分型，尤其是包括表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)在内的驱动基因突变的检测，对于晚期和转移性NSCLC患者的治疗决策至关重要。目前临床核酸获取来源包括肿瘤组织石蜡标本、胸腔积液离心后的细胞学标本、血液、胸腔积液上清等体液中的游离DNA。本研究旨在采用肺穿刺活检组织的双蒸水浸洗液提取的核酸进行基因突变检测，验证该核酸来源的可行性，并分析其检测结果与基于穿刺活检组织的二代测序(next-generation sequencing,NGS)检测结果的一致性，为后续的病理诊断与治疗提供依据。方法：纳入中南大学湘雅二医院肿瘤科收治的临床诊断为NSCLC的女性患者，在CT引导下经皮肺穿刺活检，活检组织通过石蜡包埋制作切片进行NGS检测；同时提取活检组织双蒸水浸洗液中的DNA，采用超扩增阻滞突变系统-聚合酶链式反应(super amplification refractory mutation system-polymerase chain reaction,Super-ARMS)法进行EGFR基因突变检测，DNA剩余量符合质控标准的组织标本进一步行NGS基因检测。比较穿刺活检组织双蒸水浸洗液的基因检测结果与相应石蜡切片标本的NGS基因检测结果的一致性。此外，分别测定经皮肺穿刺活检标本及穿刺针浸洗液的DNA含量，比较二者的差异。结果：对于29例NSCLC患者，穿刺活检组织双蒸水浸洗液Super-ARMS法检测出EGFR基因突变阳性19例、阴性10例，组织石蜡样本NGS法检测出EGFR基因突变阳性20例、阴性9例。穿刺活检组织双蒸水浸洗液Super-ARMS法对比组织石蜡样本NGS法的敏感度为95%，特异度为100%，阳性预测值为100%，阴性预测值为90%，准确率为96.5%。6例穿刺活检组织双蒸水浸洗液经Super-ARMS法后的DNA符合质控标准，行NGS基因检测的结果显示EGFR基因突变阳性3例、阴性3例，与Super-ARMS法完全一致，与组织石蜡样本NGS检测结果相符。穿刺活检组织双蒸水浸洗液Super-ARMS法的EGFR基因检测需1～2 d,NGS检测需7 d，组织石蜡样本NGS检测需14～15 d。3例NSCLC穿刺组织双蒸水浸洗液与穿刺针浸洗液的DNA含量配对比较结果显示，组织浸洗液DNA含量高于穿刺针浸洗液DNA含量。结论：CT引导下经皮肺穿刺活检标本的双蒸水浸洗液提取的DNA，可作为快速高效获得NSCLC基因分型的核酸标本来源，尽早为临床诊疗提供依据。

关键词

穿刺组织浸洗液 / 核酸来源 / EGFR基因突变检测 / 非小细胞肺癌 / 活检