抗寄生虫药物雷琐太尔对表皮葡萄球菌的抗菌活性及其抗菌机制

摘要

目的：表皮葡萄球菌是临床常见的机会致病菌，抗生素滥用致其耐药性不断攀升，治疗难度显著加大。药物再利用具有成本低、安全性高、周期短等优势，是应对耐药菌感染的有效策略。本研究旨在探究抗寄生虫药物雷琐太尔对表皮葡萄球菌的抗菌活性，并初步阐明其作用机制。方法：采用微量肉汤稀释法测定雷琐太尔对表皮葡萄球菌的最低抑制浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)和最低杀菌浓度(minimum bactericidal concentration,MBC)。采用纸片扩散法、2, 3-二(2‑甲氧基‑4‑硝基‑5‑磺苯基)-2H-四氮唑-5‑甲酰苯胺[2, 3-Bis-(2-methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl)-2H-tetrazolium-5-carboxanilid,XTT]法及时间-杀菌曲线检测雷琐太尔对表皮葡萄球菌的敏感性。通过连续诱导耐药试验评估其耐药诱导能力。利用结晶紫染色和XTT法检测该药对生物膜的抑制与根除作用。采用棋盘微稀释法探究其与传统抗生素的联合效果。通过测定膜通透性、质子动力势、细菌内腺苷三磷酸(adenosine triphosphate,ATP)水平及碘化丙啶染色初步阐明抗菌机制。最后建立小鼠皮肤脓肿模型，评价雷琐太尔的体内抗菌活性。结果：雷琐太尔对表皮葡萄球菌的MIC和MBC分别为2μg/mL和16μg/mL。纸片扩散法显示雷琐太尔对表皮葡萄球菌具有明显的抑菌作用。XTT法结果显示，雷琐太尔可显著降低表皮葡萄球菌的活力(P<0.05)。时间-杀菌曲线显示1/4×MIC雷琐太尔即可有效抑制细菌的增殖。连续处理15 d，表皮葡萄球菌均未对雷琐太尔产生耐药。结晶紫染色和XTT染色均显示，1μg/mL的雷琐太尔可显著抑制生物膜的形成，2μg/mL的雷琐太尔可使已形成的生物膜显著减少(均P<0.05)。雷琐太尔可改变质子动力势、抑制细菌内ATP合成并破坏细菌细胞膜完整性。在小鼠皮肤脓肿模型中，经雷琐太尔治疗后，脓肿组织的细菌载量显著降低(P<0.05)。结论：雷琐太尔对表皮葡萄球菌具有体外和体内抗菌作用，其抗菌机制在于破坏表皮葡萄球菌的完整性，改变质子动力势，以及抑制细胞内ATP的合成。

关键词

表皮葡萄球菌 / 雷琐太尔 / 生物膜 / 质子动力势 / 最低抑制浓度 / 最低杀菌浓度

基金资助

湖南省重点领域研发计划(2022SK2116)