澳洲茄边碱通过调控肝星状细胞YAP信号抗肝纤维化（英文）

摘要

目的：澳洲茄边碱是一种天然化合物，来源于传统中药植物龙葵（Solanum nigrum L.），具有多种生物活性，包括抗炎、抗疟、促凋亡、镇痛和抗肿瘤活性等。然而，澳洲茄边碱对肝纤维化的影响尚未明确。本研究旨在采用人肝星状细胞（LX-2细胞）及四氯化碳（carbon tetrachloride,CCl₄）诱导的肝纤维化小鼠模型探究澳洲茄边碱抗肝纤维化的作用和潜在机制。方法：采用澳洲茄边碱（1.25、2.50μmol/L）处理LX-2细胞24 h，细胞计数试剂盒-8（cell counting kit-8,CCK-8）检测细胞增殖活性，实时荧光定量PCR（real-time quantitative PCR,RT-qPCR）和蛋白质印迹法检测肝纤维化标志基因和蛋白质的表达水平。将C57BL/6J小鼠随机分为对照组、CCl₄组、CCl₄+0.5 mg/kg澳洲茄边碱组、CCl₄+1.0 mg/kg澳洲茄边碱组。对照组腹腔注射橄榄油，CCl₄组和澳洲茄边碱处理组连续4周腹腔注射CCl₄（每周3次）以诱导肝纤维化，同时，澳洲茄边碱处理组分别按低、高剂量隔日腹腔注射澳洲茄边碱进行治疗。采集肝脏和血浆进行检测。采用苏木精-伊红（hematoxylin and eosin,HE）、天狼星红、Masson及免疫组织化学染色检测肝脏病理结构改变和纤维化程度，RT-qPCR和蛋白质印迹法检测肝纤维化标志基因和蛋白质的表达水平；采用试剂盒检测血清谷草转氨酶（aspartate aminotransferase,AST）和谷丙转氨酶（alanine aminotransferase,ALT）水平及肝脏羟脯氨酸含量。随后，探讨澳洲茄边碱是否调控肝纤维化过程中Yes相关蛋白（Yes-associated protein,YAP）信号通路。采用澳洲茄边碱（1.25、2.50μmol/L）处理LX-2细胞24 h，蛋白质印迹法检测大型肿瘤抑制激酶1（large tumor suppressor kinase1, LATS1）、 p-LATS1（Thr1079）及YAP、 p-YAP（Ser397）蛋白的表达，RT-qPCR检测YAP、 Ctgf、 Ankrd1 mRNA的表达。结果：CCK-8结果显示，1.25、2.50μmol/L澳洲茄边碱处理LX-2细胞24 h及48 h后，细胞增殖活力较对照组均显著下降（均P<0.05）。RT-qPCR和蛋白质印迹法结果显示，与对照组比较，澳洲茄边碱处理组纤维化标志基因Acta、Col1a1、TGF-β1、Timp1、PDGF-A及炎症因子IL-6、TNF-α的mRNA表达水平均显著降低（均P<0.05），平滑肌肌动蛋白α（smooth muscle actin α,α-SMA）及Ⅰ型胶原α1链（collagen type I alpha 1 chain,Col1a1）蛋白表达亦显著下调（均P<0.05）。与CCl₄组相比，CCl₄+澳洲茄边碱组小鼠肝脏病理损伤均明显减轻，炎症细胞浸润均减少；天狼星红和Masson染色定量分析表明，胶原沉积面积均显著减少，肝脏羟脯氨酸含量明显降低（均P<0.05）；血清ALT和AST水平均显著下降（均P<0.05）；同时，肝组织中Acta、Col1a1的m RNA表达水平及α-SMA的蛋白质表达水平均显著下调（均P<0.05）。在LX-2细胞中，与对照组相比，澳洲茄边碱处理均可显著降低YAP蛋白表达水平（均P<0.05），同时升高p-LATS1（Thr1079）蛋白水平（P<0.05）;LATS1总蛋白及p-YAP（Ser397）蛋白表达的差异无统计学意义（均P>0.05）；此外，YAP、Ctgf及Ankrd1的mRNA水平均显著下降（均P<0.05）。结论：澳洲茄边碱通过抑制YAP表达，下调Ctgf和Ankrd1表达水平，从而抑制肝纤维化的发生和发展，有望成为抗肝纤维化治疗的潜在候选药物。

关键词

澳洲茄边碱 / YAP信号通路 / 肝星状细胞 / 四氯化碳 / 肝纤维化