NPLOC4通过增强Wnt/β-catenin介导的线粒体自噬促进肝细胞癌细胞增殖、侵袭和迁移

梁帅; 逯子川; 朱忠成; 唐甜甜; 叶轲

中南大学学报（医学版） ›› 2026, Vol. 51 ›› Issue (7) : 1303 -1318.

梁帅, 逯子川, 朱忠成, 唐甜甜, 叶轲

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摘要

目的：线粒体自噬失调可导致肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的发生与发展。核蛋白定位4同源物(nuclear protein localization 4 homolog,NPLOC4)是多种细胞过程中的必需蛋白质，与多种肿瘤有关。研究表明NPLOC4参与线粒体自噬的调节，但其在HCC中的作用仍不清楚。本研究旨在探究NPLOC4在HCC线粒体自噬中的作用及调控机制。方法：对来源于基因表达综合数据库(Gene Expression Omnibus,GEO)的GSE277232和GSE251942数据集中的RNA测序数据和来源于GeneCards数据库的线粒体自噬相关基因进行分析，筛选出HCC中与线粒体自噬相关的差异表达基因，并对NPLOC4的表达进行分析，同时通过蛋白质印迹法进行验证。采用干扰小RNA(small interfering RNA,siRNA)敲低HCC细胞中NPLOC4的表达以进行功能缺失试验。采用线粒体自噬相关蛋白质表达分析、透射电子显微镜、免疫荧光染色方法来分析线粒体自噬水平。结果：通过生物信息学筛选发现，NPLOC4是一种关键的线粒体自噬相关差异表达基因。NPLOC4在HCC中显著高表达，并与不良临床预后相关(均P<0.05)。敲低NPLOC4抑制了HCC细胞增殖、迁移、侵袭，并促进了细胞凋亡(均P<0.05)。此外，敲低NPLOC4还抑制了HCC细胞线粒体自噬和Wnt/β-catenin信号通路(均P<0.05)。使用Wnt激动剂BML-284后，NPLOC4敲低对线粒体自噬的抑制作用被抵消(P<0.05)，这表明NPLOC4敲低通过抑制Wnt/β-catenin信号通路调控线粒体自噬。使用线粒体自噬诱导剂羰基氰化物间氯苯腙(carbonyl cyanide m-chlorophenyl hydrazone,CCCP)后，也逆转了NPLOC4敲低对HCC细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用(均P<0.05)，这表明NPLOC4敲低通过调节线粒体自噬抑制HCC进程。结论：NPLOC4在HCC中呈高表达。下调NPLOC4表达可抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活，进而抑制线粒体自噬，最终抑制HCC细胞的增殖、迁移和侵袭。NPLOC4可能作为HCC潜在的生物标志物及治疗靶点。