HBV HBx蛋白调控肝癌细胞增殖的机制研究

摘要

目的 探讨HBV HBx蛋白调控肝癌细胞增殖的潜在机制。方法 过表达HBx后,检测肝癌细胞HepG2的增殖水平。在过表达Flag-HBx的肝癌细胞HepG2中免疫共沉淀HBx后进行蛋白质质谱鉴定,Score阈值设定为大于50,Coverage阈值设定为大于10。过表达HBx的肝癌细胞HepG2中,使用siRNA敲低质谱鉴定的相应基因,检测HepG2的增殖水平。结果 过表达Flag-HBx后,肝癌细胞HepG2的增殖水平上升（P<0.05）。与对照组比较,敲低MCUR1后肝癌细胞HepG2的增殖水平下降（P<0.05）。与对照组比较,同时过表达MCUR1和HBx能够促进肝癌细胞HepG2的增殖（P<0.05）,而仅过表达MCUR1对肝癌细胞HepG2的增殖无显著影响。与过表达HBx组比较,过表达HBx的同时敲低MCUR1时肝癌细胞HepG2的增殖水平下降（P<0.05）。与对照组比较,过表达HBx后肝癌细胞HepG2的ROS水平上升（P<0.05）;与对照组比较,过表达HBx的同时敲低MCUR1时肝癌细胞HepG2的ROS水平无显著变化。与对照组或过表达HBx组比较,同时过表达MCUR1和HBx能够增加肝癌细胞HepG2的ROS水平（P<0.05）。与过表达HBx组比较,过表达HBx的同时敲低MCUR1时肝癌细胞HepG2的增殖水平下降（P<0.05）,但这种下降能被H₂O₂恢复。与对照组比较,过表达HBx后肝癌细胞HepG2中转录因子Nrf2在细胞核中的定位增加（P<0.05）,而过表达HBx的同时敲低MCRU1后Nrf2在细胞核中的定位无显著变化。与对照组比较,过表达HBx后肝癌细胞HepG2中转录因子Notch的激活形式NICD1在细胞核中的定位增加（P<0.05）,而过表达HBx的同时Nrf2抑制剂ML385处理后NICD1在细胞核中的定位无显著变化。与过表达HBx组比较,过表达HBx的同时ML385处理后肝癌细胞HepG2的增殖水平下降（P<0.05）。与过表达HBx组比较,过表达HBx的同时Notch抑制剂IMR-1处理后肝癌细胞HepG2的增殖水平下降（P<0.05）。结论 HBx促进HepG2细胞增殖与MCUR1/ROS/Nrf2/Notch轴有关。

关键词

HBx / 肝癌 / 增殖 / ROS / MCUR1