过表达miR-193b-5p介导自噬逆转宫颈癌细胞顺铂化疗耐药的作用研究

摘要

目的 探究过表达微小RNA-193b-5p （miR-193b-5p）对人宫颈癌顺铂（cisplatin,DDP）耐药细胞株SiHa/DDP化疗耐药性的影响及机制。方法 培养人宫颈癌细胞株SiHa和人宫颈癌顺铂耐药细胞株SiHa/DDP,MTT法检测不同浓度（5、10、15、20、25、30μmol/L） DDP处理后两种细胞的存活率,测定半抑制浓度(IC₅₀)值。将实验分为SiHa组、SiHa/DDP组、mimics NC组（转染mimics NC的SiHa/DDP细胞）、miR-193b-5p mimics组（转染miR-193b-5p mimics的SiHa/DDP细胞）,实时荧光定量PCR（RTqPCR）法检测细胞中miR-193b-5p表达。DDP处理上述细胞后,MTT法和流式细胞术检测各组细胞存活率、凋亡率,细胞免疫荧光染色检测细胞中LC3B表达,蛋白质印迹实验检测各组细胞中LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin-1、P62蛋白质表达。结果 与SiHa细胞比较,同一浓度DDP处理下的SiHa/DDP细胞存活率显著升高（P<0.05）,SiHa/DDP细胞的IC₅₀值显著升高（P<0.05）,而细胞中miR-1931b-5p相对表达量显著下调（P<0.05）。细胞转染后,与对照组和mimics NC组比较,miR-193b-5p mimics组SiHa/DDP细胞中miR-193b-5p相对表达量显著上调（P<0.05）。与SiHa/DDP组、mimics NC组比较,miR-193b-5p mimics组SiHa/DDP细胞存活率显著下降、细胞凋亡率显著增加（P<0.05）,细胞中LC3B荧光强度明显减弱,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值、Beclin-1蛋白质相对表达量显著下调（P<0.05）,P62蛋白质相对表达量显著上调（P<0.05）。结论 miR-193b-5p在人宫颈癌顺铂耐药细胞株SiHa/DDP中表达下降,其过表达能够逆转SiHa/DDP细胞对DDP的耐药性,该作用可能与其抑制细胞自噬水平有关。

关键词

宫颈癌 / 微小RNA-193b-5p / 顺铂 / 化疗耐药 / 自噬