神经胶质瘤U251细胞中TRIM21和TRIM8之间相互作用研究

摘要

目的 探讨TRIM21和TRIM8在神经胶质瘤U251细胞中的相互作用机制及其生物学效应。方法在U251细胞中分别过表达和敲低TRIM21或TRIM8,通过蛋白质印迹和RT-PCR法检测两者的蛋白和m RNA表达水平。利用免疫荧光实验分析TRIM21和TRIM8的亚细胞定位。通过免疫共沉淀实验验证TRIM21和TRIM8之间的相互作用。应用胞内泛素化实验检测TRIM21和TRIM8的泛素化修饰。蛋白酶体抑制剂MG-132用于抑制蛋白酶体活性。利用流式细胞术检测U251细胞凋亡。结果 在U251细胞中,TRIM21负向调控TRIM8蛋白水平,反之, TRIM8也可以负向调控TRIM21蛋白水平,并且都能抑制细胞凋亡。机制研究显示, U251细胞中TRIM21和TRIM8之间存在相互结合,两者相互调控是通过催化泛素化介导的泛素-蛋白酶体依赖性降解途径实现的。结论 U251细胞中TRIM21与TRIM8可以通过泛素化修饰促进泛素-蛋白酶体依赖性的蛋白质降解相互负向调控,提示体内细胞正常生长分化需要TRIM21-TRIM8之间蛋白质水平的相对稳态,也即可能存在E3泛素连接酶蛋白稳态,稳态失衡可能与肿瘤的发生发展密切相关。

关键词

TRIM21 / TRIM8 / 相互调控 / 泛素化 / E3稳态 / 胶质瘤