c-Myc/miR-27b-3p上调Bcl-2促进多发性骨髓瘤存活的分子机制研究

摘要

目的 探索c-Myc/miR-27b-3p/Bcl-2轴促进多发性骨髓瘤(multiple myeloma, MM)存活的分子机制。方法 以骨髓间充质干细胞(bone marrow stem cells, BMSCs)为对照组, qPCR法测定人MM细胞系RPMI8226和U266细胞中MM相关基因和microRNAs (miRNAs)的相对表达水平。TargetScan和双荧光素酶报告基因方法分别预测和验证miR-27b-3p和Bcl-2的直接序列互作关系。通过分离14名新疆医科大学第五附属医院临床确诊为MM的患者的原代MM细胞, qPCR法测定其中c-Myc、 Bcl-2的mRNA及miR-27b-3p的相对表达水平;Pearson相关性分析3者的相关性。构建腺病毒过表达c-Myc (c-Myc OE)或Bcl-2(Bcl-2 OE)载体以及miR-27b-3p抑制物(miR-27b-3p inhibitor)载体并转染BMSCs。蛋白质印迹测定BM-SCs中p-STAT3、 STAT3、 p-JAK2和JAK2的表达水平。结果 与BMSCs细胞相比, c-Myc和Bcl-2 mRNA在RPMI8226和U266细胞中均显著上调(P<0.01), miR-27b-3p在RPMI8226和U266细胞中均显著下调(P<0.01)。荧光素酶报告基因结果显示miR-27b-3p直接靶向Bcl-2的3′-UTR区域。qPCR及Pearson相关性分析结果显示, c-Myc mRNA与miR-27b-3p RNA相对表达水平、 miR-27b-3p RNA与Bcl-2 mRNA相对表达水平呈线性负相关(P<0.01);而c-Myc mRNA与Bcl-2 mRNA相对表达水平呈线性正相关(P<0.01)。与BMSCs组相比, BMSCs+c-Myc OE组、 BMSCs+miR-27b-3p inhibitor组、 BMSCs+Bcl-2 OE组细胞中p-STAT3、 STAT3、 p-JAK2、 JAK2的表达水平均升高(P<0.05)。结论 MM通过上调c-Myc的表达抑制miR-27b-3p从而激活Bcl-2,促进MM细胞存活。

关键词

多发性骨髓瘤 / c-Myc / miR-27b-3p / Bcl-2 / JAK2/STAT3 / 细胞存活