乳糜泻中lncRNA GAS5通过靶向miR-155调节Th17/Treg失衡

摘要

目的 探讨长链非编码RNA（lncRNA） GAS5通过靶向miR-155调节Th17/Treg失衡在乳糜泻中的作用。方法 收集20例乳糜泻患者（乳糜泻组）及同时期20例无乳糜泻或其他自身免疫性疾病的健康体检者（健康组）的外周血,分选两组的CD4⁺T细胞。q RT-PCR法检测乳糜泻患者与对照组CD4⁺T细胞中lncRNA GAS5以及miR-155的表达,流式细胞术分析Th17/Treg比例。Pearson统计分析lnc RNA GAS5、miR-155的表达水平与Th17/Treg比例的相关性。体外实验中,将乳糜泻组患者的CD4⁺T细胞分为7组:对照组, pcDNA3.1-NC组, pc DNA3.1-GAS5组, miR-NC组, miR-155-mimics组, pc DNA3.1-GAS5+miRNC组, pc DNA3.1-GAS5+miR-155-mimics组。q RT-PCR法检测各组细胞中lnc RNA GAS5和miR-155的表达。Edu染色和Hoest33342染色法分别检测各组CD4⁺T细胞的增殖和凋亡。细胞免疫荧光染色检测各组CD4⁺T细胞中IL-17和Foxp3的表达。流式细胞术检测CD4⁺T细胞中IL-17⁺细胞和Foxp3⁺细胞的比例。结果 与健康组相比,乳糜泻组lnc RNA GAS5的表达水平降低, miR-155的表达水平增加。lnc RNA GAS5表达与Th17/Treg比例呈负相关性（r=-0.65,P<0.05）, miR-155表达与Th17/Treg比例呈正相关性（r=0.70,P<0.05）。乳糜泻组CD4⁺T细胞中,与pc DNA3.1-NC组相比, pc DNA3.1-GAS5组中lnc RNA GAS5和Foxp3的表达水平、 CD4⁺T细胞的增殖率和Foxp3⁺细胞比例均增加（P_均<0.05）,而miR-155和IL-17的表达水平、 CD4⁺T细胞的凋亡率及IL-17⁺细胞比例均降低（P_均<0.05）;与miR-NC组相比, miR-155-mimics组中Foxp3的表达水平、 CD4⁺T细胞的增殖率和Foxp3⁺细胞比例均降低（P_均<0.05）,而miR-155和IL-17的表达水平、 CD4⁺T细胞的凋亡率及IL-17⁺细胞比例均增加（P_均<0.05）;与pc DNA3.1-GAS5+miR-NC组比, pcDNA3.1-GAS5+miR-155-mimics组中Foxp3的表达水平、 CD4⁺T细胞的增殖率和Foxp3⁺细胞比例均降低（P_均<0.05）,而miR-155和IL-17的表达水平、 CD4⁺T细胞的凋亡率及IL-17⁺细胞比例均增加（P_均<0.05）。结论 lncRNA GAS5通过靶向miR-155调节Th17/Treg失衡,影响乳糜泻患者CD4⁺T细胞的增殖和凋亡,进而影响IL-17和Foxp3的表达,提示lncRNA GAS5可能是乳糜泻治疗的潜在靶点。

关键词

乳糜泻 / 长链非编码RNA GAS5 / 微小RNA-155 / 辅助性T细胞17 / 调节性T细胞