β-catenin蛋白H36P突变对肝癌细胞的增殖的影响

摘要

目的 探究β-catenin蛋白H36P突变对肝癌细胞的增殖的影响。方法 通过PCR扩增法扩增CTNNB1基因,包括WT-CTNNB1、G34-TRCNNB1和H36P-CTNNB1。通过双酶切法克隆至p-CMV5质粒载体,将相对应的质粒瞬转至Huh7、HepG2细胞中,并检测其蛋白表达情况。其次,使用CHX按时间梯度处理表达目的基因的细胞,比较H36P-β-catenin与WT-β-catenin、G34R-β-cateinin的泛素化降解情况并分析蛋白稳定性。随后通过质核分离检测H36P-β-catenin核转位能力。最后,通过CCK-8计数法检查H36P-β-catenin对肝癌细胞增殖能力的影响。结果 突变体G34R、H36P的蛋白质表达水平,与野生型β-catenin无明显差异。在HepG2细胞株中,CHX作用8 h时WT-β-catenin几乎完全降解,而G34R和H36P只降解了75%和60%。Huh7细胞株中的情况类似,6hrs时WT-β-catenin几乎完全降解,而G34R和H36P只降解了约40%。以上结果差异均具有统计学意义(P<0.05)。相较于WT-β-catenin,G34R和H36P促使HepG2细胞增殖量提升。在表达β-catenin突变体的肝癌细胞泛素化降解受抑制的情况下,与WT-β-catenin、突变体G34R相比,表达突变体H36P的肝癌细胞核转位明显增加。结论 β-catenin蛋白H36P突变蛋白表达稳定、核转位情况增多,泛素化降解过程受阻,并能促进HepG2和Huh7肝癌细胞的增殖。

关键词

β-catenin蛋白 / 突变 / 肝癌 / 增殖