LncRNA BLACAT1调节miR-324-5p/MAP4K3轴对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

摘要

目的 探讨长链非编码RNA膀胱癌相关转录本1 （LncRNA BLACAT1）调节mmiR-324-5p/丝裂原活化蛋白激酶激酶激酶激酶3 （MAP4K3）轴对人肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法 实时荧光定量PCR （RT-qPCR）检测肝癌组织、癌旁组织以及人正常肝细胞、人肝癌细胞（Huh-7、SMMC-7721、MHCC97 L）中BLACAT1、miR-324-5p、MAP4K3 mRNA的表达水平;将肝癌细胞系Huh-7细胞分为:ctrl组、si-NC组、si-BLACAT1组、si-BLACAT1+miR-NC组、si-BLACAT1+miR-324-5p inhibitor组;实时荧光定量PCR （RT-qPCR）检测各组细胞中BLACAT1、miR-324-5p、M4P4K3 mRNA的表达;CCK-8法检测细胞增殖;划痕实验检测细胞迁移;Transwell小室检测细胞侵袭;蛋白免疫印迹检测细胞中MAP4K3、PCNA、MMP2、MMP9、c-Myc、Cyclin D1的表达;双荧光素酶报告基因实验分别验证BLACAT1和miR-324-5p、miR-324-5p和MAP4K3的关系。结果 肝癌组织和人肝癌细胞系中BLACAT1、MAP4K3 mRNA表达水平显著增加,miR-324-5p表达显著降低（P<0.05）;与ctrl组、si-NC组比较,si-BLACAT1组Huh-7细胞的BLACAT1、MAP4K3 mRNA表达、4₄₅₀值、迁移率、侵袭率、PCNA、MMP2、MMP9、MAP4K3、c-Myc、Cyclin D1表达明显降低（P<0.05）,miR-324-5p表达显著增加（P<0.05）;抑制miR-324-5p表达减弱了敲低BASCAT1对Huh-7细胞的增殖、迁移和侵袭能力的抑制作用;BASCAT1靶向负调控miR-324-5p表达,miR-324-5p靶向调控MAP4K3表达。结论 敲低BLACAT1可能通过靶向miR-324-5p来下调MAP4K3表达,进而抑制肝癌细胞增殖、迁移和侵袭。

关键词

LncRNA BLACAT1 / miR-324-5p / MAP4K3 / 肝癌 / 增殖 / 迁移 / 侵袭

基金资助

南充市科技计划项目（No.20YFZJ0125）