白藜芦醇抑制肾纤维化减轻单侧输尿管梗阻诱导的肾损伤

摘要

目的 研究白藜芦醇抑制肾纤维化对单侧输尿管梗阻诱导的肾损伤的减轻作用及相关机制。方法以Sprague-Dawley (SD)大鼠和成纤维细胞NRK-49F为实验对象,分别进行体内研究和体外验证,体内:SD大鼠行单侧输尿管梗阻诱导建立TIF大鼠模型,将大鼠随机分为4组(假手术+空白组、假手术+白藜芦醇组、模型+空白组和模型+白藜芦醇组),每组12只大鼠。体外:将NRK49F细胞用重组TGF-β1 (5 ng/mL)或白藜芦醇(10和100μmol/L)处理后随机分为4组(对照组、TGF-B1组、TGF-β1+白藜芦醇低剂量组和TGF-β1+白藜芦醇高剂量组)。Masson's染色检测肾脏中总胶原蛋白沉积;免疫组织化学染色检测组织中E-cadherin、GFAP和Ki67阳性细胞的表达;免疫荧光染色检测细胞中Ki67阳性细胞的表达;蛋白质印迹检测组织中E-cadherin、Vimentin、N-cadherin、Rac1、c-Myc、Bcl-2、Cyclin D1、α-SMA、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的表达。结果 与对照组比较,白藜芦醇可以抑制大鼠体内单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)肾脏中总胶原蛋白的过度沉积,下调α-SMA阳性成肌纤维细胞减少波形蛋白、Ⅰ型和Ⅲ型胶原,抑制Rac1、GFAP和N-cadherin的上调以及E-cadherin的下调;与假手术组比较,白藜芦醇可显著降低UUO大鼠中Ki67阳性细胞比率,并抑制c-Myc,Bcl-2和cyclin D1的表达;白藜芦醇抑制体内增殖相关途径Wnt/β-catenin的激活;体外实验表明白藜芦醇治疗可减少成纤维细胞和TECs的增殖,从而抑制TGF-β1介导的表型转化和ECM积累。结论 白藜芦醇通过抑制Wnt/β-catenin通路的活性,抑制成肌纤维细胞的积累,并减轻了肾小管间质纤维化。

关键词

慢性肾病 / 白藜芦醇 / 单侧输尿管梗阻 / 肾小管间质纤维化 / 细胞外基质 / Wnt/β-catenin通路