靶向EBV潜伏膜蛋白1的单克隆抗体促进HIV相关EBV阳性伯基特淋巴瘤细胞凋亡的分子机制

摘要

目的 制备和筛选抑制伯基特淋巴瘤（Burkitt lymphoma,BL）的抗EBV潜伏膜蛋白1 （latent membrane protein-1,LMP1）单克隆抗体。方法 人工合成EBV潜伏膜蛋白1的跨膜结构域5 （transmembrane domain5,TMD5）,并以此为抗原,采用杂交瘤法制备抗TMD5单抗。ELISA法测定小鼠腹水中的抗体效价。7-氨基放线菌素D （7-Aminoactinomycin D,7-AAD）/Annexin V-PE双标记流式细胞术和JC-1染色联合流式细胞术测定线粒体膜电势评估单抗对BL细胞系Daudi细胞的促凋亡活性。蛋白质印迹法测定Daudi细胞内促存活信号通路p38-MAPK/IKK/NF-κB相关蛋白的表达水平。结果 经过2轮筛选,获得R2-2-5E-6C和R2-2-8D-3A两种单抗,这2种单抗均能与TMD5发生抗体-抗原特异性结合,而与GAPDH无免疫反应。与NC组相比,R2-2-5E-6C组和R2-2-8D-3A组处理后的Daudi细胞中Annexin V⁺7-AAD⁺细胞所占百分比增加;JC-1荧光强度<10～4的细胞所占百分比增加;胞内p38-MAPK、IKK和NF-κB的表达水平降低（P<0.05）。结论 筛选获得的抗TMD5单抗R2-2-5E-6C和R2-2-8D-3A可通过抑制LMP1介导的p38-MAPK/IKK/NF-κB信号通路的活性促进BL凋亡。

关键词

跨膜结构域5 / 潜伏膜蛋白1 / HIV-相关EBV-阳性伯基特淋巴瘤 / 单克隆抗体