MCL1调控GSK3β/Wnt/β-catenin信号轴促进急性T淋巴细胞白血病细胞对维奈克拉耐药的机制研究

摘要

目的 探究髓样细胞白血病因子1 （myeloid cell leukemia factor 1, MCL1）促进急性T淋巴细胞白血病（acute T lymphocytic leukemia, T-ALL）细胞对维奈克拉耐药的分子机制。方法 培养T-ALL亲本细胞系Jurkat和T-ALL维奈克拉耐药细胞系Jurkat/VEN,将靶向MCL1的小干扰RNA （si-MCL1）和阴性对照（si-NC）转染至Jurkat/VEN细胞, RT-qPCR和蛋白质印迹法检测转染后细胞中MCL1表达以验证转染效果,蛋白质印迹法检测转染后细胞中糖原合成酶激酶3β （glycogen synthase kinase-3β, GSK3β）、磷酸化GSK3β （p-GSK3β）、 β-连环蛋白（β-catenin）、骨髓细胞瘤病毒癌基因（c-Myc）、细胞周期蛋白D1（cyclin D1）表达。Jurkat/VEN细胞分为对照组、 si-NC组、 si-MCL1组、 si-MCL1+CHIR-99021组。CCK-8法、克隆形成实验和流式细胞术分别检测不同浓度（0、 100、 200、 300、 400、 500 nmol/L）维奈克拉处理下各组Jurkat/VEN细胞存活率、形成的克隆数目及细胞凋亡率。结果 与Jurkat细胞比较, Jurkat/VEN细胞中MCL1蛋白表达增加（P<0.05）, GSK3β蛋白表达减少（P<0.05）, p-GSK3β及β-catenin、 c-Myc、Cyclin D1蛋白表达增加（P<0.05）;细胞转染后,与对照组、 si-NC组比较, si-MCL1组Jurkat/VEN细胞中MCL1 mRNA及蛋白表达减少（P<0.05）, GSK3β蛋白表达增加（P<0.05）, p-GSK3β、 β-catenin、 c-Myc、 Cyclin D1蛋白表达减少（P<0.05）。与对照组、 si-NC组比较, si-MCL1组Jurkat/VEN细胞在各浓度维奈克拉作用下的存活率和IC₅₀值降低（P<0.05）,克隆数目减少（P<0.05）,凋亡率升高（P<0.05）;与si-MCL1组比较, si-MCL1+CHIR-99021组Jurkat/VEN细胞在各浓度维奈克拉作用下的存活率和IC₅₀值升高（P<0.05）,克隆数目增加（P<0.05）,凋亡率降低（P<0.05）。结论 干扰MCL1表达可降低Jurkat/VEN细胞对维奈克拉的耐药性,这可能是通过阻断GSK-3β/Wnt/β-catenin信号轴实现的。

关键词

急性T淋巴细胞白血病 / 髓样细胞白血病因子1 / 维奈克拉 / 耐药