Circular RNA LPAR3通过miR-143-5p/USP14通路调控食管癌细胞糖酵解的研究

摘要

目的 探究调控食管癌细胞糖酵解的机制。方法 逆转录实时定量PCR （quantitative real-time,qRT-PCR）法分别检测环状RNA溶血磷脂酸受体（circular RNA lysophosphatidic acid receptor 3,CircLPAR3）,微小RNA-143-5 （microRNA-143-5p,miR-143-5p）和泛素特异性蛋白酶14 （ubiquitin-specific protease 14,USP14）的表达水平;使用Seahorse XF 24细胞外通量分析仪测量细胞外酸化率（extracellular acidification rate,ECAR）和耗氧率（oxygen comsumpition rate,OCR）;Western印迹法检测糖酵解途径关键酶HK2的表达水平;使用Starbase数据库预测CircLPAR3与miR-143-5p以及miR-143-5p与USP14的靶向结合位点,双荧光素酶试验验证CircLPAR3和miR-143-5p以及miR-143-5p与USP14的靶向关系。结果 与正常人食管上皮细胞（normal human esophageal epithelial cells,Het-1A）组比较,食管癌细胞系中CircLPAR3高表达,且KYSE450细胞系的表达最高,同时miR-143-5p低表达而USP14高表达。与Het-1A组比较,KYSE450组HK2的蛋白表达水平增加,同时细胞ECAR增加,整体糖酵解OCR减少;敲低CircLPAR3的表达导致细胞HK2的蛋白表达水平减少,ECAR减少,整体糖酵解OCR增加;在抑制CircLPAR3的表达情况下,抑制miR-143-5p的表达能够部分逆转细胞的糖酵解途径;双荧光素酶实验验证了CircLPAR3和miR-143-5p的靶向关系,以及miR-143-5p和USP14的靶向关系。结论 CircLPAR3能够通过调控miR-143-5p/USP14通路调节食管癌细胞糖酵解途径。

关键词

环状RNA溶血磷脂酸受体 / 微小RNA-143-5 / 泛素特异性蛋白酶14 / 食管癌 / 糖酵解