基于NLRP3/caspase-1通路研究木犀草素对脂多糖诱导的肠上皮细胞焦亡的影响

摘要

目的 探讨木犀草素对脂多糖(LPS)诱导的肠上皮细胞焦亡及核苷酸结合寡聚化结构域样受体家族吡啉结构域蛋白3 (NLRP3)/半胱氨酸蛋白酶1 (caspase-1)通路的影响。方法 体外培养人肠上皮细胞HIEC-6,对其进行(1.0μg/mL) LPS诱导,并将细胞分为对照组、LPS组、LPS+(25、50、100μmol/L)木犀草素组、木犀草素+NLRP3激活剂尼日利亚菌素钠盐(NSS)组,除对照组外均添加1.0μg/mL的LPS。MTT法检测各组细胞活力;电阻仪检测单层上皮跨膜电阻(TEER);酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组细胞上清液乳酸脱氢酶(LDH)、肿瘤坏死因子α (TNF-α)、白介素-6(IL-6)水平;蛋白免疫印迹(WB)法检测各组细胞焦亡相关蛋白(GSDMD、GSDMD-N)及NLRP3、caspase-1、IL-lβ的表达。结果 与对照组比较,LPS组HIEC-6细胞活力、TEER值显著降低,细胞上清液LDH水平、TNF-α、IL-6、蛋白GSDMD、GSDMD-N、NLRP3、caspase-1、IL-1β表达显著升高(P <0.05);与LPS组比较,LPS+(25、50、100μmol/L)木犀草素组HIEC-6细胞活力、TEER值显著升高,细胞上清液LDH水平、TNF-α、IL-6、GSDMD、GSDMD-N、NLRP3、caspase-1、IL-1β表达显著降低(P<0.05);与LPS+100μmol/L木犀草素组比较,木犀草素+NSS组HIEC细胞活力、TEER值显著降低,细胞上清液LDH水平、TNF-α、IL-6、GSDMD、GSDMD-N、NLRP3、caspase-1、IL-1β表达显著升高(P<0.05)。结论 木犀草素能够减轻LPS诱导的人肠上皮细胞HIEC-6焦亡和细胞炎性损伤,可能与NLRP3/caspase-1信号通路的抑制有关。

关键词

木犀草素 / 脂多糖 / 肠上皮细胞 / 核苷酸结合寡聚化结构域样受体家族吡啉结构域蛋白3 / 半胱氨酸蛋白酶1 / 炎性损伤