miR-142-5p靶向MCL-1对胆管癌细胞上皮-间质转化及吉西他滨化疗敏感性的影响

摘要

目的 探讨miR-142-5p靶向髓细胞白血病因子1 (myeloid cell leukemin-1,MCL-1)对人胆管癌细胞QBC939上皮间质化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)及吉西他滨(Gemcitabine,GEM)化疗敏感性的影响。方法 体外培养胆管癌细胞QBC939及人正常胆管上皮细胞HIBEC,随机分为对照组、miR-142-5p阴性对照(NC)组和miR-142-5p模拟物(mimics)组。实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测各组QBC939细胞和HIBEC细胞中miR-142-5p和MCL-1 mRNA表达情况;划痕实验和Transwell实验分别检测各组QBC939细胞迁移和侵袭变化情况;蛋白印迹分析法检测各组QBC939细胞上皮型钙黏蛋白(Ecadherin)、神经性钙黏附蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)表达变化;双荧光素酶报告实验验证miR-142-5p与MCL-1的靶向关系;使用浓度为0.625μg/mL GEM处理转染miR-142-5p后的QBC939细胞,同时设置对照组,MTT检测细胞增殖,Annexin V-FITC/PI试剂盒检测细胞凋亡。结果 与人正常胆管细胞HIBEC相比,胆管癌细胞QBC939中miR-142-5p呈低表达,MCL-1 mRNA呈高表达。经Targetscan Human数据库预测显示,miR-142-5p与MCL-1 mRNA 3'UTR区有结合位点。与MCL-1-3'UTR-WT+miR-142-5p NC组比较,MCL-1-3'UTR-WT+miR-142-5p mimics组荧光素酶活性降低(P<0.05)。与对照组和miR-142-5p NC组相比,miR-142-5p mimics组QBC939细胞miR-142-5p表达水平、E-cadherin蛋白表达水平显著升高(P<0.05),MCL-1 mRNA和蛋白表达、N-cadherin、Vimentin蛋白表达水平显著降低(P<0.05),细胞迁移、侵袭能力显著减弱(P<0.05);与miR-142-5p NC+GEM组相比,miR-142-5p mimics+GEM组QBC939细胞存活率显著降低,凋亡率增加(P<0.05)。结论 过表达miR-142-5p可通过靶向抑制MCL-1表达从而抑制人胆管癌细胞的EMT、增加胆管癌细胞对GEM的化疗敏感性。

关键词

miR-142-5p / 髓细胞白血病因子1 / 胆管癌细胞 / 上皮间质转化