脂肪干细胞来源外泌体通过miR-654-3p促进牙周韧带干细胞成骨分化

摘要

目的 探究脂肪干细胞来源外泌体(ADSCs-Exo)通过miR-654-3p途径对牙周韧带干细胞(periodontal ligament stem cells, PDLSCs)成骨分化的影响。方法 体外分离、鉴定、培养人ADSCs,并分离其外泌体。体外分离人PDLSCs,将miR-654-3p抑制物(miR-654-3p inhibitor)或其阴性对照(inhibitor NC)转入细胞或联合成骨诱导液培养,将细胞分为对照(Blank)组、 ADSCs-Exo组、 inhibitor NC组、 inhibitor NC+ADSCs-Exo组、 miR-654-3p inhibitor组、 miR-654-3p inhibitor+ADSCs-Exo组。诱导7 d时,采用RTq PCR法检测各组细胞中miR-654-3p、骨钙素(osteocalcin, OCN)和Ⅰ型胶原(COL1A1) m RNA表达水平,采用碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)活性试剂盒检测各组细胞中ALP活性;诱导21 d时,采用茜素红染色法检测各组细胞钙结节形成能力,采用蛋白质印迹法检测各组细胞中OCN和COL1A1蛋白表达水平。结果 与Blank组或inhibitor NC组比较, ADSCs-Exo组细胞中miR-654-3p表达水平、 ALP活性、OCN和COL1A1 m RNA及蛋白表达水平均升高(P<0.05),细胞钙结节形成能力增强(P<0.05); miR-654-3p inhibitor组细胞中miR-654-3p表达水平降低。与inhibitor NC+ADSCs-Exo组比较, miR-654-3p inhibitor+ADSCs-Exo组细胞中ALP表达水平、 OCN和COL1A1 m RNA及其蛋白表达水平均降低(P<0.05),细胞钙结节形成能力减弱(P<0.05)。结论 ADSCs-Exo通过上调miR-654-3p表达促进PDLSCs成骨分化。

关键词

脂肪干细胞 / 外泌体 / 牙周韧带干细胞 / miR-654-3p / 成骨分化