敲低lncRNA LINC01296通过Wnt/β-catenin通路抑制骨肉瘤细胞增殖能力及干性特征

摘要

目的 探究敲低长链非编码RNA (lncRNA) LINC01296对人骨肉瘤(osteosarcoma, OS)细胞增殖能力和干性特征的影响,初步探究相关机制。方法 培养人正常成骨细胞系h FOB1.19与人OS细胞系MG63、 U2OS、 Saos2,实时荧光定量PCR (qRT-PCR)检测lnc RNA LINC01296的表达情况。将MG63细胞分为对照组、 si RNA阴性对照组(阴性对照NC si RNA转染至细胞)、 LINC01296 si RNA干扰组(LINC01296si RNA转染至细胞)、 LINC01296 si RNA+Li Cl组(LINC01296 si RNA转染至细胞并用10 mmol/L Wnt/β-catenin通路激活剂Li Cl培养24 h),检测各组中lnc RNA LINC01296表达情况, CCK-8法检测各组细胞存活率,Ed U染色观察各组细胞增殖情况,肿瘤细胞球体形成实验检测各组细胞的球体数目,蛋白质印迹法检测各组细胞中干性相关蛋白(Nanog、 OCT-4、 SOX2)及Wnt/β-catenin通路相关蛋白(β-catenin、 c-Myc、 Cyclin D1)的表达水平。结果 人OS细胞系MG63、 U2OS、 Saos2中lnc RNA LINC01296相对表达量显著高于h FOB1.19细胞(P<0.05)。与对照组比较, LINC01296 si RNA组MG63细胞存活率显著降低(P<0.05),Ed U阳性细胞比例显著降低(P<0.05),肿瘤细胞球体数目显著减少(P<0.05),细胞中Nanog、 OCT-4、SOX2及β-catenin、 c-Myc、 Cyclin D1的蛋白相对表达量均显著下调(P<0.05);与LINC01296 si RNA组比较, LINC01296 si RNA+Li Cl组MG63细胞存活率显著升高(P<0.05), Ed U阳性细胞比例也显著升高(P<0.05),肿瘤细胞球体数目显著增加(P<0.05),同时细胞中Nanog、 OCT-4、 SOX2及β-catenin、 c-Myc、Cyclin D1的蛋白相对表达量均显著上调(P<0.05)。结论 在OS细胞中靶向敲低lnc RNA LINC01296表达能够抑制细胞增殖能力,降低细胞干性特征,该机制可能与抑制Wnt/β-catenin通路的激活有关。

关键词

骨肉瘤 / 长链非编码RNA LINC01296 / 增殖 / 肿瘤干性 / Wnt/β-catenin通路