lncRNA ANRIL靶向miR-324-5p对卵巢癌SKOV-3细胞侵袭及干细胞样特性的影响

摘要

目的 阐明lncRNA ANRIL通过miR-324-5p调控卵巢癌细胞侵袭转移及干细胞特性的分子机制。方法 构建ANRIL稳定敲减SKOV-3细胞模型(Control组、shRNA-NC组、ANRIL-shRNA1组)。通过Transwell实验和划痕实验以及侵袭标志物VEGF/Fibronectin的蛋白质印迹检测评估细胞侵袭转移能力;通过肿瘤成球试验,以及检测干性标志物CD44/SOX2/OCT4,解析干细胞特性;通过双荧光素酶报告实验验证ANRIL与miR-324-5p靶向互作;设计功能回复实验(ANRIL-shRNA1+miR-324-5p inhibitor共转染组)明确miR-324-5p在ANRIL-shRNA1调控侵袭关键因子(VEGF)及干性标志物(CD44)中的介导作用。结果ANRIL敲减使SKOV-3细胞侵袭能力下降,划痕愈合率降低,且侵袭关键因子VEGF和Fibronectin表达显著下调。同时,干细胞成球数目减少,CD44、SOX2、OCT4表达水平较对照组显著降低。双荧光素酶实验证实ANRIL-shRNA直接结合miR-324-5p。抑制miR-324-5p可逆转ANRIL敲减对VEGF和CD44的抑制作用。结论 lncRNA ANRIL通过靶向miR-324-5p促进细胞侵袭,,维持肿瘤干细胞特性。

关键词

卵巢癌 / lncRNA ANRIL / miR-324-5p / 肿瘤干细胞