包虫抗原B通过抑制TAZ促进RANKL/NF-κB/TAK1介导的破骨细胞发生

摘要

目的 探讨包虫抗原B (hydatid antigen-B, Hyd-B)促进破骨细胞发生的分子机制。方法 细胞实验分组-1:BMSCs细胞分为Control组、 MCSF+RANKL组和MCSF+RANKL+Hyd-B组;使用巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony-stimulating factor, MCSF)联合可溶性核因子κB受体激活配体(receptor activator of nuclear factor-κb ligand, RANKL),外加/不加Hyd-B联合诱导骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs)向破骨细胞分化。细胞实验分组-2:BMSCs细胞分为Ctrl组和Hyd-B处理组(Treat组)。免疫共沉淀(co-IP)法测定Hyd-B对TAZ (transcriptional coactivator with PDZ-binding motif)和TAK1 (transforming growth factor β-activated kinase 1)的直接相互作用的影响,使用抗TAK1抗体进行IP、IB检测TAZ的表达。细胞实验分组-3:BMSCs细胞分为Control组、 MCSF+RANKL组、 MCSF+RANKL+Hyd-B组、 MCSF+RANKL+Hyd-B+TAZ-OE组和MCSF+RANKL+Hyd-B+OE-vector组。BMSCs转染腺病毒-TAZ OE或腺病毒-OE vector介导过表达TAZ。q PCR法检测破骨细胞分化标志物TRAP和Cathepsin K m RNA相对表达水平。蛋白质印迹检测细胞核p-P65、细胞质P65、细胞核NFATc1、 p-AKT、 AKT、 p-ERK1/2、 ERK 1/2、 p-TAZ、 TAZ和TAK1的表达水平。结果 与Control组比较, MCSF+RANKL组和MCSF+RANKL+Hyd-B组细胞TRAP和Cathepsin K m RNA水平升高(P<0.05); p-P65、 p-AKT、 p-ERK 1/2水平升高(P<0.05);细胞核内p-P65和NFATc1的水平升高(P<0.05)。与MCSF+RANKL组相比较, MCSF+RANKL+Hyd-B组细胞上述指标表达水平进一步升高(P<0.05)。与MCSF+RANKL+Hyd-B组相比较,MCSF+RANKL+Hyd-B+TAZ OE组细胞上述指标表达水平降低(P<0.05)。Co-IP结果,与Ctrl组相比较, Treat组中TAZ与TAK1的相互作用增加(P<0.05)。与Ctrl组相比较, Treat组中细胞质p-TAZ磷酸化水平增加(P<0.05), TAZ表达水平降低(P<0.05)。结论 Hyd-B通过抑制TAZ上调RANKL/NF-κB/TAK1介导的破骨细胞发生。

关键词

骨包虫病 / 包虫抗原B / RANKL/NF-κB/TAK1 / TAZ / 破骨细胞分化