药根碱通过下调MAOB表达抑制骨肉瘤细胞迁移和侵袭

摘要

目的 探讨药根碱对骨肉瘤发展的作用及其机制。方法 通过网络药理学分析筛选药根碱对骨肉瘤作用靶点, GSEA富集分析单胺氧化酶B (monoamine oxidase B, MAOB)表达与骨肉瘤临床表型间的关系;检测药根碱不同剂量(0、 2、 4、 8、 16μmol/L)作用下骨肉瘤细胞MG63、 U2OS细胞活性,选取后续功能试验药根碱剂量, CCK-8法、 Transwell实验分别检测MG63、 U2OS细胞增殖、迁移和侵袭,蛋白质印迹检测增殖细胞相关抗原Ki67、基质金属蛋白酶2 (matrix metalloproteinase 2, MMP2)、 MMP9蛋白表达;建立裸鼠骨肉瘤皮下移植模型,测算各组肿瘤组织质量、体积,免疫组化检测Ki67表达;蛋白质印迹检测药根碱对骨肉瘤细胞MABO蛋白表达影响;采用sh RNA干扰MAOB表达,并检测其对骨肉瘤细胞增殖影响。结果 网络药理学预测出包括MAOB在内药根碱对骨肉瘤作用靶点10个, GSEA富集分析表明MAOB与骨肉瘤预后情况(P<0.05)及生存期相关(log-rankP<0.05); MG63、 U2OS细胞存活能力随着药物剂量增加而降低,当药根碱剂量为8μmol/L时,骨肉瘤细胞存活能力降低约50%,故选择8μmol/L进行后续功能实验;体外实验显示与Control组比较,药根碱组细胞增殖速率显著降低(P<0.05),侵袭和迁移细胞数量显著降低(P<0.05), Ki67、 MMP2、 MMP9蛋白水平显著下调(P<0.05);体内实验显示,药根碱组裸鼠皮下瘤生长速度显著降低(P<0.05),皮下瘤质量和体积均降低(P<0.05),肿瘤组织中Ki67表达水平显著降低(P<0.05)。药根碱在体外呈时间和浓度依赖性抑制骨肉瘤细胞MAOB表达(P<0.05)。与sh NC组比较,敲低MAOB组能显著抑制骨肉瘤细胞增殖(P<0.05);转染过表达MAOB载体可逆转药根碱对骨肉瘤细胞增殖、侵袭、迁移的抑制作用(P<0.05)。结论 MAOB表达水平与骨肉瘤预后和生存相关, MAOB促进细胞增殖、侵袭和肿瘤转移;药根碱通过抑制MAOB表达抑制骨肉瘤细胞增殖、侵袭和迁移。

关键词

药根碱 / 骨肉瘤 / 单胺氧化酶B / 细胞增殖 / 细胞迁移 / 细胞侵袭