低温下ZF4细胞miR-183-5p的作用研究

摘要

目的 探讨miR-183-5p在斑马鱼(Danio rerio)胚胎成纤维(ZF4)细胞低温适应中的表达情况与作用机制。方法RT-qPCR检测ZF4细胞中miR-183-5p的表达,使用靶基因预测数据库Targetscan Fish预测miR-183-5p的靶基因,Turbofect转染试剂对miR-183-5p模拟物/miRNA阴性对照(miR-183-5p mimics/miR-NC)进行转染,并进行后续CCK-8法细胞活力检测实验和双荧光素酶活性报告实验。结果 18℃低温培养30 d后ZF4细胞中miR-183-5p的表达量显著升高,且细胞活力检测实验发现过表达miR-183-5p可增强低温下ZF4细胞活力;miR-183-5p的保守性分析显示其在物种间高度保守,使用生物信息方法与RTqPCR预测并初步验证了miR-183-5p潜在的靶基因,双荧光素酶活性报告实验进一步验证了miR-183-5p可与egr1的3'UTR结合。结论 miR-183-5p可能通过egr1在斑马鱼细胞低温适应过程中起到保护作用,这为进一步探索斑马鱼低温适应机制奠定了基础,并为低温治疗的分子机制研究提供了新思路。

关键词

斑马鱼 / F4细胞 / 低温 / miRNA