M2型巨噬细胞来源外泌体调控HGF/c-Met通路参与多发性骨髓瘤细胞转移的作用研究

摘要

目的 探究M2型巨噬细胞来源的外泌体对人多发性骨髓瘤细胞转移的影响及机制。方法 在体外将THP-1细胞诱导分化成M0型和M2型巨噬细胞,实时荧光定量聚合酶反应(RT-qPCR)检测诱导后M2型巨噬细胞标志物血红蛋白清道夫受体(CD163)、白细胞介素-10 (IL-10)、精氨酸酶-1 (Arg-1)、转化生长因子-β1 (TGF-β1)的表达水平,分离M2型巨噬细胞来源的外泌体;将RPMI-8226细胞分为对照组、 M0-Exos组、 M2-Exos组, Transwell小室法检测细胞迁移数目与侵袭数目,蛋白质印迹检测细胞中N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、 E-钙黏附蛋白(E-cadherin)及转录因子Snail的表达水平,并检测肝细胞生长因子(HGF)/c-Met相关蛋白的表达水平;接着将RPMI-8226细胞分为对照组、M2-Exos组、 SU11274组、 SU11274+M2-Exos组, Transwell小室法检测细胞迁移数目与侵袭数目,蛋白质印迹检测细胞中N-cadherin、 Vimentin、 E-cadherin及Snail表达水平。结果 与M0型巨噬细胞比较, M2型巨噬细胞中CD163、 IL-10、 Arg-1、 TGF-β1的m RNA表达水平均显著上调(P<0.05);从M2型巨噬细胞中分离的颗粒物中有CD9、 CD63、 TSG101、 ALIX蛋白表达,由此判定该颗粒物为外泌体。与对照组比较,M2-Exos组细胞迁移与侵袭数目均显著增加(P<0.05), N-cadherin、 Vimentin、 Snail蛋白表达显著增加(P<0.05), E-cadherin蛋白表达显著减少(P<0.05), HGF蛋白表达及p-c-Met/c-Met比值也显著增加(P<0.05)。与M2-Exos组比较, SU11274+M2-Exos组细胞迁移与侵袭数目显著减少(P<0.05), N-cadherin、Vimentin、 Snail蛋白表达显著减少(P<0.05),且E-cadherin蛋白表达显著增加(P<0.05)。结论 M2型巨噬细胞来源的外泌体能够促进人多发性骨髓瘤细胞迁移、侵袭及EMT,加剧肿瘤细胞转移,该作用与调控HGF/c-Met通路有关。

关键词

人多发性骨髓瘤 / 肿瘤相关巨噬细胞 / 外泌体 / HGF/c-Met通路