上调Numb通过调控铁死亡途径增加胃癌细胞化疗敏感性的机制研究

摘要

目的 探究在胃癌细胞中上调细胞命运决定子Numb对胃癌细胞化疗敏感性的影响及其作用机制。方法 通过脂质体转染技术将pc DNA3.1空质粒、 pc DNA3.1-Numb质粒分别转染至胃癌细胞系BGC-823中,实时荧光定量PCR (qRT-PCR)和蛋白质印迹检测转染后细胞中Numb表达变化,采用不同浓度的多柔比星(doxorubicin, ADM)处理转染后的BGC-823细胞, MTT法检测细胞增殖抑制率。将BGC-823细胞分为对照组、 NC组、 Numb组、 Numb+铁死亡抑制剂Ferrostatin-1 (Fer-1)组, MTT法检测各组细胞增殖抑制率, DCFH-DA荧光探针法检测各组细胞活性氧(reactive oxygen species, ROS)水平,试剂盒检测各组细胞谷胱甘肽(glutathione, GSH)、丙二醛(malondialdehyde, MDA)含量及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)活力,铁离子检测试剂盒测定各组细胞内铁离子浓度, RT-qPCR和蛋白质印迹法检测各组细胞中铁死亡相关途径因子P53、谷胱甘肽过氧化物酶4 (glutathione peroxidase 4, GPX4)和溶质载体家族7成员11 (solute carrier family 7 member 11, SLC7A11)表达水平。结果 与对照组、 NC组比较,Numb组细胞中Numb m RNA和蛋白相对表达量均显著上调(P<0.05),在不同浓度ADM处理下的细胞增殖抑制率显著升高(P<0.05)。使用Fer-1干预并进行分组处理后,与对照组、 NC组比较, Numb组细胞增殖抑制率显著升高(P<0.05),细胞中ROS水平、 MDA含量显著增加(P<0.05), GSH含量显著减少(P<0.05), SOD活性显著降低(P<0.05), Fe2+浓度显著升高(P<0.05), P53 m RNA和蛋白相对表达量显著上调(P<0.05), GPX4、 SLC7A11的m RNA和蛋白相对表达量显著下调(P<0.05);与Numb组比较, Numb+Fer-1组BGC-823细胞增殖抑制率显著降低(P<0.05),细胞中ROS水平和MDA含量显著减少(P<0.05), GSH含量显著增加、 SOD活性显著升高(P<0.05),同时细胞内Fe2+浓度显著降低(P<0.05), P53 m RNA和蛋白相对表达量显著下调(P<0.05),而GPX4、 SLC7A11的m RNA和蛋白相对表达量显著上调(P<0.05)。结论 上调Numb能够提高胃癌细胞对ADM的化疗敏感性,该机制可能与其调控P53/SLC7A11/GPX4通路诱导铁死亡的作用有关。

关键词

胃癌 / 化疗敏感性 / Numb / 铁死亡