miR-499a-3p/GAB1轴在心力衰竭中的作用及机制

摘要

目的 探究miR-499a-3p在心力衰竭(heart failure, HF)患者血浆中的表达水平及其分子机制。方法 收集HF患者和健康对照组的血浆, RT-qPCR检测其miR-499a-3p水平;人心肌细胞系转染miR-499a-3p模拟物, CCK-8检测细胞存活能力,流式细胞术和TUNEL检测细胞凋亡水平,蛋白质印迹检测细胞凋亡通路相关蛋白的表达水平;建立心衰细胞模型,转染miR-499a-3p抑制物, CCK-8和流式细胞术检测细胞的存活能力和凋亡水平;双荧光素酶报告基因系统分析miR-499a-3p与GAB1的关系; RT-qPCR、蛋白质印迹探究miR-499a-3p对GAB1表达的影响;在人心肌细胞中转染miR-499a-3p模拟物的同时转染GAB1质粒,检测心肌细胞功能变化。结果 与对照组血浆中的miR-499a-3p的表达相比, HF患者的表达显著升高(t=77.47,P<0.01); miR-499a-3p模拟物显著降低心肌细胞的存活率,增加凋亡细胞的比例和TUNEL阳性细胞比例(P<0.05);且转染miR-499a-3p模拟物后,凋亡抑制蛋白Bcl-2表达降低,而凋亡促进蛋白Caspase-3和Bax表达上调;进一步研究发现, miR-499a-3p在心衰细胞中显著高表达,而抑制miR-499a-3p表达后,心衰细胞的存活率显著升高,凋亡比例显著降低(P<0.05);双荧光素酶报告基因系统结合RT-qPCR及蛋白质印迹结果表明, miR-499a-3p可结合到GAB1的3′-UTR,在m RNA和蛋白水平靶向抑制GAB1的表达; miR-499a-3p模拟物对心肌细胞存活和凋亡的影响可以被GAB1过表达所逆转。结论 HF患者中miR-499a-3p表达升高, miR-499a-3p可通过抑制GAB1的表达,影响心肌细胞存活和凋亡,参与HF的发生进展。

关键词

心力衰竭 / miR-499a-3p / GAB1 / 心肌细胞 / 凋亡