外泌体miR-24作为海绵体增强肾小管上皮表达S100A8促进线粒体损伤和肾结石的致病机制研究

摘要

目的 探讨体外建立肾结石细胞模型外泌体中miR-24和S100A8的表达水平变化及其促进肾结石病的作用机制。方法 使用人近端肾小管上皮HKC-8细胞建立体外肾结石细胞模型。HKC-8细胞分为4组:对照组、模型组、过表达miR-24+模型组(模型组细胞转染miR-24 mimic)、过表达对照+模型组(模型组细胞转染mimic NC)。Target Scan v7.2对miR-24和S100A8 3′-UTR进行生物信息学分析。双荧光素酶报告基因分析佐证miR-24和S100A8 3′-UTR的直接序列互作。提取细胞外泌体。q PCR法测定外泌体中miR-24水平。蛋白质印迹法测定外泌体中CD9、 CD63和S100A8蛋白质水平;测定细胞内线粒体自噬标志物PINK1、 Parkin和细胞色素C (cytochrome C, Cyt-C)的表达水平。ELISA法测定细胞上清液炎症细胞因子TNF-α、 IL-1β和IL-6的水平以及细胞内丙二醛(malondialdehyde, MDA)水平。DCFH-DA荧光染料法测定细胞内活性氧自由基(reactive oxygen species, ROS)的水平。结果 双荧光素酶报告基因分析证明miR-24和S100A8 3′-UTR之间是直接序列互作关系。与对照组相比,模型组细胞外泌体中miR-24被抑制,S100A8被上调(P<0.05);线粒体自噬标志物PINK1、 Parkin和Cyt-C的表达水平上调(P<0.05); ROS水平和MDA水平上调(P<0.05);细胞上清液中炎症细胞因子TNF-α、 IL-1β和IL-6水平上调(P<0.05)。与模型组相比,过表达miR-24+模型组部分逆转了上述指标(P<0.05),而过表达对照+模型组细胞上述指标无明显差异(P> 0.05)。结论 肾结石细胞模型的外泌体中miR-24作为海绵体增强肾小管上皮表达S100A8,促进线粒体损伤和肾结石。

关键词

肾结石病 / 草酸钙结晶 / 肾小管上皮细胞 / 线粒体自噬 / 氧化应激 / 炎症