精氨酸调节蛋白ArgR调控铜绿假单胞菌Ⅵ型分泌系统表达

摘要

目的 研究精氨酸调节蛋白ArgR对铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)中Ⅵ型分泌系统(typeⅥsecretion system,T6SS)相关基因表达的调节作用。方法 构建带有SUMO标签的ArgR蛋白表达载体,利用大肠埃希菌DH5α异源表达铜绿假单胞菌ArgR蛋白。采用凝胶电泳迁移(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)实验探究ArgR与T6SS相关基因hsiA2启动子的相互作用;构建带有Flag标签的Hcp2-Flag表达载体,利用蛋白质免疫印迹实验和qRT-PCR技术检测argR基因对T6SS结构基因hcp2的调控。结果 通过酶切去标签,得到可溶性的ArgR蛋白;EMSA结果显示ArgR和hsiA2启动子有结合。Western印迹和qRT-PCR实验结果表明在argR缺失的突变体中hcp2的表达量明显升高,回补argR后,hcp2的表达量可以补回至野生型的水平。结论 研究表明ArgR能结合hsiA2启动子并负调控T6SS相关基因的表达。

关键词

铜绿假单胞菌 / ArgR / Ⅵ型分泌系统 / 转录调控 / 基因表达