miR-660-5p调控P53对高糖诱导的肾小球系膜细胞损伤的影响

摘要

目的 探索miR-660-5p调控P53对高糖诱导的肾小球系膜细胞损伤的影响。方法 首先将肾小球系膜细胞SV40-MES-13细胞分为2组:对照组和高糖组,用于分析高糖对SV40-MES-13细胞活性及miR-660-5p/P53表达的影响。然后将高糖处理过后的SV40-MES-13细胞分为4组:miR NC组、 miR-660-5p mimic组、 si NC组与si P53组。实时荧光定量PCR实验检测SV40-MES-13细胞中miR-660-5p和P53的表达水平;噻唑蓝试剂法(MTT)分析SV40-MES-13细胞的生长能力;原位末端标记法(TUNEL)以及流式细胞术分析SV40-MES-13细胞的凋亡率; Targetscan检索以及荧光素酶报告基因实验分析SV40-MES-13细胞中miR-660-5p与P53的靶向作用关系;蛋白质印迹分析P53蛋白的表达。结果 与对照组比较,高糖处理后导致SV40-MES-13细胞增殖活性降低,凋亡率增加, miR-660-5p表达降低而P53表达增加。与miR-660-5p NC组比较, miR-660-5p mimic处理后的SV40-MES-13细胞增殖活性增加,凋亡率降低。与si NC组比较, si P53处理后的SV40-MES-13细胞增殖活性增加,凋亡率降低。miR-660-5p与P53存在结合域,且能抑制P53表达。结论 高糖处理肾小球系膜细胞后, miR-660-5p表达水平降低, P53表达水平增加,上调肾小球系膜细胞的miR-660-5p的表达后,高糖处理后的肾小球系膜细胞增殖活性增加,凋亡率下降,并且miR-660-5p的这一作用与抑制P53的表达相关。

关键词

miR-660-5p / P53 / 肾小球系膜细胞 / SV40-MES-13 / 糖尿病肾病 / 凋亡 / 增殖