miR-495-3p/WIF1/Wnt信号通路轴调节视网膜母细胞瘤细胞增殖、迁移和侵袭

摘要

目的 分析miR495-3p/Wnt抑制因子(Wnt inhibitor factor 1,WIF1)/Wnt信号通路轴调节视网膜母细胞瘤(retinoblastoma,RB)细胞增殖、迁移和侵袭。方法 生物信息学分析WIF1的差异表达及与临床不良表型之间的关系,并预测miRNA靶标;双荧光酶素报告实验验证。构建稳定过表达WIF1的RB细胞(Vector组、WIF1组)。构建稳定过表达miR-495-3p的RB细胞(miR-NC组、miR-495-3p组和miR-495-3p+WIF1组)。Western印迹检测WIF1蛋白及Wnt通路相关蛋白表达,并进行体外功能试验。裸鼠移植瘤实验分析移植瘤体积重量。免疫组化分析WIF1在RB组织中水平。结果WIF1低表达,与迁移、侵袭有关,为miR495-3p靶标,双荧光酶素报告实验证实WIF1是miR495-3p作用靶点。WIF1过表达抑制细胞增殖、迁移和侵袭,影响细胞周期,诱导凋亡。体内实验显示WIF1在RB组织中过表达,其过表达抑制瘤体生长。过表达WIF1下调β-catenin、c-Myc蛋白水平(P<0.05)。过表达miR495-3p下调WIF1蛋白水平,上调β-catenin和c-Myc蛋白水平,促进细胞增殖迁移、迁移和侵袭,抑制细胞凋亡(P<0.05),增加WIF1表达可逆转miR495-3p的作用(P<0.05)。结论miR495-3p靶向WIF1通过Wnt信号通路抑制RB细胞增殖、迁移和侵袭,并诱导凋亡。

关键词

视网膜母细胞瘤 / miR-495-3p / 信号通路