丹参酮Ⅱ-A调控Th17/Treg免疫平衡影响骨关节炎软骨退变大鼠中TLR4相关通路表达的机制研究

摘要

目的 探讨丹参酮Ⅱ-A (tanshinoneⅡ-A, TSⅡ-A)对骨关节炎(osteoarthritis, OA)软骨退变大鼠中调节性T细胞(regulatory T, Treg)/辅助性T细胞17 (Th17)的影响,以及其对Toll样受体4 (Tolllike receptor 4, TLR4)信号的调控。方法 以关节腔注射木瓜蛋白酶构建大鼠OA模型。造模成功后,分为TSⅡ-A低剂量组(TSⅡ-A-L)、 TSⅡ-A高剂量组(TSⅡ-A-H)、阳性对照药物硫酸氨基葡萄糖(glucosamine sulfate, DGS)组进行药物干预;酶联免疫吸附试验检测大鼠血清中肿瘤坏死因子-α (tumor necrosis factor-α, TNF-α)和白细胞介素-6 (interleukin-6, IL-6)水平;脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记试剂盒(TUNEL)检测大鼠软骨组织中的细胞凋亡;流式细胞仪检测脾组织中Treg、 Th17的比重,实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测大鼠膝关节软骨组织中TLR4、髓样分化因子88 (myeloid differentiation factor 88, MyD88)、以及核转录因子(nuclear factorκB, NF-κB)、蛋白聚糖(aggrecan)和Ⅱ型胶原(CollagenⅡ)、叉状头/翅膀状螺旋转录因子3 (forkhead/winged helix transcription factor 3,Foxp3)、 IL-17、 B淋巴细胞瘤-2 (B cell lymphoma-2, Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bcl2-associated X protein, Bax)的m RNA的表达;蛋白质印迹法检测软骨组织中TLR4、 MyD88、 p-NF-κB、 Bcl-2和Bax的表达。结果 与Sham组相比,其余各组大鼠脾组织中Treg细胞的比重、膝关节软骨组织中aggrecan和CollagenⅡ以及Foxp3、 Bcl-2的表达明显下降,血清中TNF-α和IL-6的含量、软骨组织中的细胞凋亡率、脾组织中Th17细胞的比重、膝关节软骨组织中IL-17、 TLR4、 MyD88、 p-NF-κB和Bax的表达明显升高;与OA组相比, TSⅡ-A-L组、 TSⅡ-A-H组、 DGS组大鼠脾组织中Treg细胞的比重、膝关节软骨组织中aggrecan和CollagenⅡ以及Foxp3、 Bcl-2的表达明显升高,血清中TNF-α和IL-6的含量、软骨组织中的细胞凋亡率、脾组织中Th17细胞的比重、膝关节软骨组织中IL-17、 TLR4、 MyD88、 p-NF-κB和Bax的表达明显下降;与TSⅡ-A-L组相比, TSⅡ-A-H组大鼠脾组织中Treg细胞的比重、膝关节软骨组织中aggrecan和CollagenⅡ以及Foxp3、 Bcl-2的表达明显升高,血清中TNF-α和IL-6的含量、软骨组织中的细胞凋亡率、脾组织中Th17细胞的比重、膝关节软骨组织中IL-17、 TLR4、 MyD88、 p-NF-κB和Bax的表达明显下降,差异均具有统计学意义(P_均<0.05), TSⅡ-A-H组与DGS组间各指标的差异不具有统计意义(P> 0.05)。结论 丹参酮Ⅱ-A (TSⅡ-A)能明显抑制OA大鼠关节软骨组织中TLR4、 MyD88、 p-NF-κB的表达,降低软骨组织中的细胞凋亡率,这可能与改善Treg/Th17免疫失衡有关。

关键词

丹参酮Ⅱ-A / 骨关节炎 / 调节性T细胞 / 辅助性T细胞17 / Toll样受体4